הבדל מפתח - HPLC לעומת LCMS
הבה נסתכל תחילה על המשמעות של HPLC ו-LCMS לפני שננתח את ההבדל בין HPLC ל-LCMS. כרומטוגרפיה היא טכניקת הפרדה באנליזה כימית שבה מרכיבי הדגימה מופרדים במהלך המעבר דרך תווך כרומטוגרפי. זה כרוך גם באינטראקציה עם המדגם, השלב הנייח והשלב הנייד. HPLC ראשי תיבות של High Performance Liquid Chromatography, והיא משמשת כשיטת כרומטוגרפיה נוזלית בכימיה אנליטית. השילוב של כרומטוגרפיה נוזלית וספקטרוסקופיה מסה (LCMS) פותח לניתוח כמותי של ביומולקולות נבחרות וזהו הליך בדיקה רגיש, מדויק וספציפי ביותר בהשוואה ל-HPLC.זה ההבדל העיקרי בין HPLC ל- LCMC. מאמר זה יציג בפניכם HPLC ו-LCMC העוסקים בניתוח כימי וידון בהבדלים בין HPLC ל-LCMS.
מה זה HPLC?
כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) היא טכניקת הפרדה פופולרית בכימיה אנליטית. הוא משמש בעיקר להפרדת הרכיבים, לזיהוי ולכימת כל רכיב בתערובת. קודם לכן, שיטה זו הייתה ידועה ככרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה מכיוון שהיא הייתה תלויה במשאבות כדי להזרים ממס נוזלי בלחץ הכולל את תערובת הדגימה דרך עמודה עמוסה בחומר סופח מוצק. כל מרכיב ומרכיב בתערובת הדגימה מקיים אינטראקציה שונה עם החומר הסופג המוצק, מה שמביא לקצבי זרימה שונים עבור מרכיבים שונים. זה יכול להוביל להפרדה של המרכיבים כשהם זורמים החוצה מעמודת HPLC.
HPLC שימש ליישומים שונים כגון ניתוח רמות ויטמין D בדם, שימוש בסמים לא חוקיים של ספורטאים על ידי זיהוי שאריות הסמים בשתן שלהם, מיון המרכיבים של דגימה ביולוגית מורכבת למטרות מחקר וניתוח וייצור תרופות.
מה זה LCMS?
כרומטוגרפיה נוזלית–ספקטרומטריית מסה (LCMS) היא טכניקה אנליטית המשלבת את יכולות ההפרדה הפיזיות של כרומטוגרפיה נוזלים עם יכולות ניתוח המסה של ספקטרומטריית מסה (MS). כרומטוגרפיה נוזלים היא טכניקת הפרדה, וספקטרומטריית מסה משמשת לניתוח היחס בין מסה למטען של חלקיקים טעונים. ההפרדה הפיזית מושגת בדרך כלל על ידי HPLC ולחילופין, LCMS המכונה גם HPLC-MS. LCMS היא טכניקה אנליטית דומיננטית בעלת דיוק, רגישות וסגוליות גבוהים מאוד בהשוואה ל-HPLC. לפיכך, הוא שימושי ביישומים רבים כגון מטרות מחקר, ניתוח תרופות, ניתוח מזון וכו'. LCMS משמש בעיקר להפרדה, לזהות, לזהות ולכמת תכונות ביוכימיות של דגימה מסוימת בנוכחות תערובות כימיות מורכבות.
מה ההבדל בין HPLC ל-LCMC?
ראשי תיבות והגדרה של HPLC ו-LCMC
HPLC: HPLC מייצג High-Performance Liquid Chromatography. זוהי טכניקת הפרדה המשמשת בעיקר להפרדת הרכיבים, לזהות ולכמת כל רכיב בתערובת.
LCMS: LCMS ראשי תיבות של Liquid Chromatography and Mass Spectrometry. זוהי טכניקה אנליטית המשלבת את יכולות ההפרדה הפיזיקליות של כרומטוגרפיית נוזלים עם יכולות ניתוח המסה של ספקטרומטריית מסה (MS).
מאפיינים של HPLC ו-LCMC
Classification
HPLC: זוהי שיטת כרומטוגרפיה נוזלית בלבד.
LCMS: זהו שילוב של שיטת כרומטוגרפיה נוזלית ושיטת ספקטרומטריית מסה.
יעילות
HPLC: בהשוואה ל-LCMS, ניתוח HPLC פחות יעיל ואיטי יותר.
LCMS: בהשוואה ל-HPLC, ניתוח ה-LCMS יעיל ומהיר יותר.
רגישות
HPLC: בהשוואה ל-LCMS, ניתוח HPLC פחות רגיש.
LCMS: בהשוואה ל-HPLC, ניתוח ה-LCMS רגיש יותר.
Specificity
HPLC: בהשוואה ל-LCMS, ניתוח HPLC פחות ספציפי.
LCMS: בהשוואה ל-HPLC, ניתוח ה-LCMS הוא ספציפי יותר.
דיוק
HPLC: HPLC נותן תוצאות פחות מדויקות מ-LCMS לקביעת חומרים כימיים מסוימים.
LCMS: LCMS נותן תוצאות מדויקות יותר מאשר HPLC לקביעת חומרים כימיים מסוימים.
Component
HPLC: HPLC יכול להיחשב כרכיב של LCMS.
LCMS: LCMS לא יכול להיחשב כרכיב של HPLC.
מקור יון
HPLC: מקור יון לא קיים במכשיר HPLC.
LCMS: מקור יון קיים במכשיר LCMS.
Applications
HPLC: ניתן לנתח יונים, פולימרים, מולקולות אורגניות וביומולקולות באמצעות HPLC.
LCMS: ניתן לנתח מולקולות וביו-מולקולות אורגניות. בניגוד ל-HPLC, ניתן להשתמש ב-LCMS כדי לבחון תערובות שנמסו בצורה לא מלאה.
מבצע
HPLC: הדיאגרמה של מכשיר HPLC מופיעה באיור 1, והיא כוללת בדרך כלל דגימה אוטומטית, משאבות וגלאי. הדוגם מכניס את תערובת הדגימה לפאזה הניידת (תערובת בלחץ של ממיסים כגון מים, אצטוטריל ו/או מתנול) אשר מעבירה אותה לעמוד. המשאבות מספקות את הזרימה וההרכב הרצויים של השלב הנייד דרך העמוד. העמוד ממולא בסופח, שהוא חלקיק מוצק מגורען כגון סיליקה או פולימרים. הגלאי מייצר אות פרופורציונלי לכמות הנוכחות של מרכיבי הדגימה בעמודה, ולכן מאפשר ניתוח ניתן לכימות של מרכיבי הדגימה שנבחרו. מכשיר ה-HPLC נשלט, וניתוח הנתונים מסופק על ידי מיקרו-מעבד דיגיטלי ותוכנת משתמש.
איור 1: תרשים של מכשיר HPLC
LCMS: הדיאגרמה של מכשיר LCMS מופיעה באיור 2. תמצית הדוגמא מוכנסת לעמודה המורכבת מ-HPLC. עמודה זו שומרת על מטבוליטים לדוגמה המבוססים על תווים פיזיים, ומטבוליטים שונים זורמים אל ספקטרומטר המסה במרווחי זמן שונים. ספקטרוסקופיה מסה משמשת להערכת מסות של חלקיקים, לקביעת סידור היסודות של מולקולה ולהבהרת מבני המולקולה. עם זאת, יש ליינן את המדגם כדי ליצור מולקולות טעונות על מנת לקבוע את יחסי המסה למטען שלהן. לכן, במקום מכשירי HPLC, LCMS מורכב משלושה מודולים נוספים כגון מקור ברזל, מנתח מסה וגלאי. מקור יונים יכול להפוך דגימת פאזת גז ליונים ומנתח מסה המקבץ את היונים לפי המסות שלהם באמצעות שדות אלקטרומגנטיים.לבסוף, גלאי מכמת את הערכים ומספק נתונים של כל יון הקיים בדגימה. ניתן להשתמש בטכניקת LCMS הן ליישומים איכותיים והן ליישומים כמותיים.
איור 2: תרשים של מכשיר LCMS
לסיכום, HPLC היא שיטת כרומטוגרפיה נוזלית ואילו LCMS היא שילוב של כרומטוגרפיה נוזלית וספקטרומטריית מסה. לשתי טכניקות הניתוח הללו יש מאפיינים שונים, אך ניתן להשתמש בהן כדי לזהות ולכמת תכשירי מזון, תרופות ומולקולות ביו-אקטיביות אחרות.
