ההבדל העיקרי בין HPLC שלב הפוך לפאזה רגילה הוא שה-HPLC שלב הפוך משתמש בשלב נייח לא קוטבי ופאזה ניידת קוטבית בעוד שה-HPLC הפאזה הרגילה משתמש בפאזה נייחת קוטבית ובפאזה ניידת פחות קוטבית.
HPLC השלב הרגיל הוא הטכניקה העתיקה ביותר של HPLC שצווט השתמש בה בהפרדות של תמציות צמחים; הוא השתמש בגיר בעמוד זכוכית. זה היה האופן הקלאסי של הכרומטוגרפיה שהוביל לכינוי כטכניקה ה"רגילה". לעומת זאת, HPLC בפאזה הפוכה היא ההיפך מהטכניקה הרגילה, אותה פיתחו מדענים לאחרונה.
מהו HPLC שלב הפוך?
HPLC הפוכה היא טכניקה כרומטוגרפית שבה אנו משתמשים בשלב נייח הידרופובי. בין כל שיטות ה-HPLC, אנו משתמשים בשיטה זו עבור כ-70% בגלל הישימות הרחבה שלה, והשחזור שלה. השלב הנייח אינו קוטבי והפאזה הניידת קוטבית.
ברוב הפעמים, מדענים משתמשים בתערובת מימית של מים עם ממס אורגני מתערבב, קוטבי, כמו אצטוטריל או מתנול כשלב הנייד. לכן, האנליטים מקיימים אינטראקציה עם השלב הנייח הלא קוטבי.
מהו HPLC שלב רגיל?
HPLC של שלב רגיל היא טכניקה כרומטוגרפית שבה אנו משתמשים בשלב נייח הידרופילי. זוהי השיטה המסורתית של HPLC, אם כי איננו משתמשים בה כל כך. השלב הנייח הוא קוטבי, והשלב הנייד אינו קוטבי. חשוב מכך, השלב הנייד של טכניקה זו הוא 100% אורגני. זה אומר שלא משתמשים במים בשביל זה.
איור 01: פרופיל מדגם עבור כרומטוגרמות HPLC פאזה רגילה ושלב הפוך בהתאם לקוטביות הרכיבים באנליט.
בדרך כלל, הפאזה הנייחת מכילה סיליקה, ציאנו, דיול, פאזות קשורות אמינו וכו'. שלבים ניידים כוללים ממיסים אורגניים כגון הקסאן, אתיל אצטט וכו'. טכניקה זו מתבססת על החזקה של מולקולות ממס או אנליט על גבי פאזה נייחת קוטבית.
מה ההבדל בין HPLC הפוך לשלב רגיל?
HPLC הפוכה היא טכניקה כרומטוגרפית שבה אנו משתמשים בשלב נייח הידרופובי. השלב הנייח של טכניקה זו אינו קוטבי ואילו השלב הנייד הוא קוטבי. יתר על כן, מדענים משתמשים בתערובת מימית של מים עם ממס אורגני מתערבב, קוטבי, כגון אצטוטריל או מתנול כשלב הנייד ב-HPLC הפוך.לעומת זאת, HPLC השלב הרגיל הוא טכניקה כרומטוגרפית שבה אנו משתמשים בשלב נייח הידרופילי. השלב הנייח של טכניקה זו הוא קוטבי ואילו השלב הנייד אינו קוטבי. בנוסף לכך, מדענים משתמשים בממיסים אורגניים כמו הקסאן, אתיל אצטט וכו' כשלב הנייד של HPLC שלב רגיל. האינפוגרפיקה שלהלן מציגה את ההבדל בין HPLC לשלב הפוך לשלב רגיל בצורה טבלאית.
סיכום - שלב הפוך לעומת שלב רגיל HPLC
טכניקות HPLC של שלב הפוך ושלב רגיל הן שתי טכניקות כרומטוגרפיות נוזליות. ההבדל העיקרי בין HPLC לשלב הפוך לשלב נורמלי הוא שה-HPLC של שלב הפוך משתמש בשלב נייח לא קוטבי ופאזה ניידת קוטבית בעוד שה-HPLC הפאזה הרגילה משתמש בשלב נייח קוטבי ובפאזה ניידת פחות קוטבית.
