ההבדל העיקרי בין RP HPLC ל-HIC הוא ש-RP HPLC משתמש בשלב נייד יותר קוטבי ופאזה נייחת פחות קוטבית. בעוד, HIC משתמש בשלב נייח הידרופובי המאפשר למולקולות ההידרופוביות להיצמד אליו.
כרומטוגרפיה היא טכניקה אנליטית שעוזרת להפריד תערובת למרכיביה. ראשית, עלינו להמיס את המדגם כדי להיות מופרד לתמיסה. תערובת תמיסה-חומר זו נקראת השלב הנייד. ואז השלב הנייד מועבר דרך חומר אחר הנקרא השלב הנייח. השלב הנייח קובע את ההפרדה של הרכיבים. ההפרדה מתרחשת עקב חלוקת החומר בין השלב הנייד לשלב הנייח.
מה זה RP HPLC?
המונח RP HPLC הוא ראשי תיבות של Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. זה כרוך בהפרדה של רכיבים בתערובת, על פי הידרופוביות. הרכיבים ההידרופוביים בפאזה הניידת מתחברים עם הליגנדים ההידרופוביים המשומקים על הפאזה הנייח, בעוד שרכיבים הידרופיליים נחלצים דרך השלב הנייח מבלי להיצמד לפני השטח של השלב הנייח.
איור 01: HPLC Apparatus
יתרה מכך, לשיטה זו יש יותר יכולת שחזור בהשוואה לטכניקות כרומטוגרפיות אחרות, והיא מראה גם ישימות רחבה. לכן, אנו משתמשים בשיטה זו במעבדות עבור למעלה מ-75% מכל שיטות HPLC. לרוב, אנו משתמשים בתערובת מימית של מים עם ממס אורגני קוטבי כשלב הנייד.לפיכך, הוא יבטיח את הצמדת הרכיבים ההידרופוביים בתמיסה אל פני השטח של השלב הנייח.
מה זה HIC?
המונח HIC מייצג Hydrophobic Interaction Chromatography. זהו סוג של HPLC פאזה הפוכה, ושיטה זו משמשת בעיקר להפרדה של ביומולקולות גדולות כגון חלבונים. בשיטה זו, עלינו להשתמש במדיום מימי כדי ליצור את הדגימה של הביו-מולקולה. הסיבה לכך היא שממיסים אורגניים יכולים לגרום לדנטורציה של החלבונים. יתר על כן, טכניקה זו משתמשת באינטראקציה בין מולקולות גדולות עם משטח מעט הידרופובי של השלב הנייח. יתר על כן, עלינו להשתמש בריכוז מלח גבוה בדגימה מכיוון שהוא מעודד את החזקת החלבון על האריזה; תהליך זה נקרא המלחה. על ידי הפחתת ריכוז המלח בהדרגה, נוכל לגרום לביומולקולות לחמוק בנפרד בהתאם להידרופוביות שלהן.
בדרך כלל, שיטה זו משתמשת בתנאים הפוכים מזה של כרומטוגרפיה של חילופי יונים.בטכניקה זו, ראשית, עלינו להעביר תמיסת חיץ דרך העמודה על מנת להפחית את פתרון המומס בדגימה. זה גורם לאזורים הידרופוביים של החלבון לחשוף. עם זאת, כאשר המולקולה הידרופוביה יותר, נדרש פחות מלח כדי לקדם את הקישור. כאן, המומסים הפחות הידרופוביים נפלטים תחילה, ובהתאם לשינוי בריכוז המלחים, יותר מומסים הידרופוביים נפלטים אחרונים.
מה ההבדל בין RP HPLC ל-HIC?
כרומטוגרפיה היא טכניקה אנליטית להפרדה של רכיבים בתערובת. RP HPLC ו-HIC הן שתי טכניקות כרומטוגרפיות מיוחדות. ההבדל העיקרי בין RP HPLC ל-HIC הוא ש-RP HPLC משתמש בשלב נייד יותר קוטבי ופאזה נייחת פחות קוטבית, בעוד ש-HIC משתמש בשלב נייח הידרופובי, המאפשר למולקולות ההידרופוביות להיצמד אליו.
האינפוגרפיקה למטה מסכמת את ההבדל בין RP HPLC ל-HIC.
סיכום – RP HPLC לעומת HIC
כרומטוגרפיה היא טכניקה אנליטית להפרדה של רכיבים בתערובת. RP HPLC ו-HIC הן שתי טכניקות כרומטוגרפיות מיוחדות. ההבדל העיקרי בין RP HPLC ל-HIC הוא ש-RP HPLC משתמש בפאזה ניידת יותר קוטבית ובפאזה נייחת פחות, בעוד ש-HIC משתמש בשלב נייח הידרופובי, המאפשר למולקולות ההידרופוביות להיצמד אליו.
