הבדל מפתח - HPLC לעומת HPTLC
ההבדל העיקרי בין HPLC ל-HPTLC הוא ש-HPTLC מאפשר הפרדה כמותית של רכיבים במדגם בעוד ש-HPTLC אינו מאפשר הפרדה כמותית של רכיבים במדגם.
כרומטוגרפיה היא שיטת הפרדה פיזיקלית המשמשת להפרדה וזיהוי הרכיבים בתערובת. גם HPLC וגם HPTLC הן טכניקות כרומטוגרפיות. HPLC היא כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים. HPTLC היא כרומטוגרפיית שכבה דקה בעלת ביצועים גבוהים.
מה זה HPLC?
HPLC היא כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים. זוהי טכניקה אנליטית המשמשת להפרדה, זיהוי וכימות רכיבים בתערובת.בטכניקה זו, המדגם מומס בממס מתאים. ואז הממס עם המדגם מועבר דרך משאבה עם לחץ נתון. המשאבה מלאה בחומר סופג מוצק. אז חלק מהרכיבים נקשרים בחוזקה לחומר הסופג בעוד שרכיבים אחרים נקשרים בצורה רופפת. זה גורם לרכיבים להיות בעלי קצבי זרימה שונים דרך המשאבה. לכן, ניתן להפריד את הרכיבים בקלות.
איור 01: מערכת HPLC
חומר הסופח שממלא את המשאבה ידוע כפאזה נייח. הממס עם הדגימה המומסת מכונה הפאזה הניידת. המשאבה המשמשת בטכניקה זו נקראת העמודה. העמוד מלא בחומר סופח, לרוב חלקיקי סיליקה. גודלם של חלקיקים אלה עשוי לנוע בין 2-50 מיקרומטר. תהליך ההפרדה מושפע מהרכב השלב הנייד ומהטמפרטורה של המערכת.האינטראקציות בין השלב הנייח לרכיב בדגימה יכולות להיות אינטראקציות הידרופוביות, אינטראקציות דיפול-דיפול, קשר יוני וכו'.
לחץ הפעולה של ה-HPLC גבוה במידה ניכרת מזה של כרומטוגרפיית הנוזלים המסורתית. זה שוכן בסביבות 50-350 בר. ההבדל בין כרומטוגרפיה נוזלית ל-HPLC הוא שבכרומטוגרפיית נוזלים, הדגימה נופלת דרך העמוד תחת כוח הכבידה ואילו ב-HPLC הדגימה נלחצת דרך העמוד. גם גודל העמוד והחלקיקים הסופגים קטנים מאוד בהשוואה לכרומטוגרפיה הנוזלית המסורתית. עם זאת, הרזולוציה הניתנת על ידי טכניקת HPLC מעולה.
מה זה HPTLC?
HPTLC היא כרומטוגרפיה של שכבה דקה בביצועים גבוהים. זוהי הצורה המתקדמת והאוטומטית של TLC מסורתית. טכניקה זו מספקת פתרון יעיל בפרק זמן קצר. בשיטת ניתוח זו ניתן לנתח את המדגם והרפרנס בו-זמנית, מה שמאפשר להשוות את המדגם עם ההפניה.זה נותן דיוק אנליטי משופר מאשר טכניקות כרומטוגרפיות אחרות. הזמן שלוקח לניתוח הוא פחות. הטכניקה היא טכניקה בעלות נמוכה.
איור 02: ניתוח של צבעי מזון באמצעות HPTLC
שיטת HPTLC היא תהליך פשוט, וגם שלב הכנת הדגימה מתבטל (ב-TLC המסורתי, שלב הכנת הדגימה נכלל לפני ההפרדה. שלב זה כולל ניקוי והעשרה). ניתן להשתמש בממס ישירות ללא כל טיפול מקדים אם כי טכניקות כרומטוגרפיות אחרות דורשות טיפול מקדים כגון הסרת גז, סינון וכו'.
חומר הסופח המשמש ב-HPTLC הוא סיליקה עם גדלי חלקיקים קטנים מאוד. ב-TLC מסורתי, גודל החלקיקים של סיליקה הוא 5-20 מיקרומטר ואילו ב-HPTLC הוא 4-8 מיקרון. הדגימה מוחלת על צלחת HPTLC באמצעות מוליך.זה נותן יישום אחיד ובטוח. לאחר מכן מניחים את הצלחות בתא בעל השלב הנייד. החדר צריך להיות רווי באדי הפאזה הניידת. לאחר תהליך HPTLC, ניתן לזהות את הכתמים שזזו. בעת זיהוי הכתמים על הצלחת, טכניקת HPTLC משתמשת באזור UV מתאים או בתא יוד.
מה ההבדל בין HPLC ל-HPTLC?
HPLC לעומת HPTLC |
|
| HPLC היא כרומטוגרפיה נוזלית בביצועים גבוהים. | HPTLC היא כרומטוגרפיית שכבה דקה בביצועים גבוהים. |
| טכניקה | |
| ב-HPLC, הפאזה הניידת עם הממס מועברת דרך עמודה מלאה בפאזה הנייחת. | ב-HPTLC, הדגימה מזוהה על צלחת TLC וממוקמת בתוך תא המכיל את הפאזה הניידת; אז מותר לדגימה לנדוד כלפי מעלה לצלחת יחד עם השלב הנייד. |
| מדידה | |
| ב-HPLC, ההבדלים בין קצבי הזרימה של רכיבים דרך העמודה משמשים להפרדת הרכיבים במדגם. | ב-HPTLC, ההבדלים בין המרחקים שעבר כל רכיב במדגם משמשים להפרדת הרכיבים במדגם. |
| הפרדה כמותית | |
| HPLC מאפשר הפרדה כמותית של רכיבים במדגם. | HPTLC אינו מאפשר הפרדה כמותית של רכיבים במדגם. |
סיכום – HPLC לעומת HPLTLC
HPLC ו-HPTLC הן שתי טכניקות כרומטוגרפיות. ההבדל העיקרי בין HPLC ל-HPTLC הוא ש-HPTLC מאפשר הפרדה כמותית של רכיבים במדגם בעוד ש-HPTLC אינו מאפשר הפרדה כמותית של רכיבים במדגם.
