הבדל מפתח – RNASE A לעומת RNASE H
הריבונוקלאזות הן נוקלאזות שמפרקות באופן ספציפי RNA ליחידות קטנות יותר. ניתן לחלק אותם לשתי קטגוריות; אנדוריבונוקלאזים ואקסוריבונוקלאזים. אנדוריבונוקלאז הוא אנדונוקלאז שיכול לפרק RNA חד גדילי או כפול גדילי. הוא מבקע את קשרי הפוספודיסטר בתוך שרשרת פולינוקלאוטידים של RNA. הדוגמאות הן RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P ו-RNase H. Exoribonuclease הוא אקסונוקלאז שפירק RNA על ידי הסרת נוקלאוטידים סופניים מקצה 5 או 3 של מולקולת ה-RNA. הדוגמאות הן RNase R, RNase II, RNase D ו-RNase PH.ההבדל העיקרי בין RNASE A ל-RNASE H הוא שה-RNase A הוא ריבונוקלאז של הלבלב שמפרק באופן ספציפי RNA חד-גדילי לרכיבים קטנים יותר בעוד RNase H הוא אנזים לא ספציפי שמבקע את ה-RNA בהיברידית RNA-DNA ליחידות קטנות יותר באמצעות המנגנון ההידרוליטי.
מה זה RNASE A?
ה-RNase A הוא ריבונוקלאז של הלבלב שמבקע באופן ספציפי את שיירי הציטוזין והאורציל הבלתי מזווגים בקצה 3' של RNA חד-גדילי. RNase H פועל בריכוז מלח גבוה יותר (0.3M או ריכוז NaCl גבוה יותר). התגובה ההידרוליטית היא שני שלבים. הוא יוצר מוצר מזרחן 3' באמצעות מונו-פוספט ביניים מחזורי 2', 3'. למרות שהוא ספציפי ל-RNA חד-גדילי בריכוז מלח גבוה יותר, הוא יכול גם לפרק RNA ו-RNA דו-גדילי בהיברידית RNA-DNA בריכוז NaCl נמוך יותר (נמוך מ-0.3M NaCl).
ברוס מריפילד סינתזה לראשונה את האנזים הזה. RNase A הוא אנזים פופולרי מאוד במחקר מולקולרי. RNase A של לבלב בקר הוא דוגמה ל-RNase A. והוא אחד האנזימים הקשים ביותר שנמצאים בשימוש במעבדה. אנזים זה אינו זקוק לקופקטור לפעילותו. זהו אנזים יציב מאוד. RNase A הוא האנזים הראשון והחלבון השלישי אליו זוהה רצף חומצות אמינו נכון. אנזים זה קטן מאוד עם 124 חומצות אמינו ומסה מולקולרית של 12600da. ויש לו ארבעה שיירי היסטידין (His 12 ו-His 119 שמעורבים בתגובה קטליטית).
איור 01: ה-RNase A
RNase A ניתן לבודד על ידי הרתחת דגימה גולמית. כאשר רותחים, כל שאר האנזימים מפרקים את ה-RNase A הנותר. RNase A הוא אנזים יציב להפליא. אנזים זה מעכב באמצעות חלבון מעכב ריבונוקלאז, קומפלקסים של מתכות כבדות ואורידין ונדאט.
מהו RNase H?
ה-RNase H הוא אנזים ריבונוקלאז לא ספציפי שיכול לפרק RNA בהיברידית RNA-DNA באמצעות תגובה הידרוליטית. ה-RNase H מבקע את 3'- הקשר O-P של RNA בהיברידית RNA-DNA. בסופו של דבר הוא מייצר מוצרים עם סיום 3'OH ו-5' פוספט. בשכפול DNA הוא ממלא תפקיד מרכזי על ידי הסרת פריימר RNA לאחר יצירת גדילי DNA חדשים. בתנאי מעבדה, הוא מפרק באופן ספציפי RNA בהיברידית RNA-DNA אך לא DNA ו-RNA לא הכלאי. ואנזים זה משמש בדרך כלל להריסת תבנית ה-RNA לאחר יצירת גדיל DNA משלים ראשון במהלך סינתזת cDNA.
איור 02: RNase H
RNase H משתמש גם במבחני הגנת נוקלאז. זה יכול להיות משולב גם להסרת זנב פולי A מ-mRNA. ל-RNase H יש את היכולת להשמיד את ה-RNA הלא מקודד בתוך ומחוץ לתא.יוני המתכת נדרשים כקו-פקטורים לפעילות חלבון זו. ניתן להשתמש בקלטור (EDTA) כדי לעכב את האנזים RNase H.
מהם הדמיון בין RNASE A ל-RNASE H?
- שניהם חלבונים בטבע.
- שניהם הם אנדוריבונוקלאז
- שניהם יכולים לדרדר RNA.
- שניהם מבצעים תגובות הידרוליטיות.
- מעבדות מולקולריות משתמשות בשני אלה.
מה ההבדל בין RNASE A ל-RNASE H?
RNASE A לעומת RNASE H |
|
| RNase A הוא ריבונוקלאז של הלבלב שמבקע באופן ספציפי את קצה ה-3' של שיירי ציטוזין ואורציל בלתי מזווגים של RNA חד-גדילי בריכוז מלח גבוה יותר. | RNase H הוא אנזים ריבונוקלאז לא ספציפי שיכול לפרק RNA בהיברידית RNA-DNA באמצעות תגובה הידרוליטית. |
| אופי חיתוך ה-RNA | |
| RNase A מבקע במיוחד RNA חד-גדילי בריכוז מלח גבוה יותר. | RNase H מבקע RNA בהיברידית RNA- DNA. |
| צורך בגורמים משותפים לפעילות | |
| RNase A אינו זקוק לקופקטורים לפעילותו. | RNase H צריך יוני מתכת כקו-פקטורים לפעילותו. |
| מעכבי פעילות חלבון | |
| מתחמי חלבון מעכב ריבונוקלאז, מתכות כבדות ואורידין ונדאט מעכבים את פעילות RNAse A. | A chelator (EDTA) מעכב את פעילות RNase H. |
| הסרת פריימר של RNA בשכפול DNA | |
| RNase A אינו משמש להסרת פריימר RNA בשכפול DNA. | RNase H משמש להסרת פריימר RNA בשכפול DNA |
| הסרת תבנית DNA בסינתזה של DNA משלים (C-DNA) | |
| RNase A אינו משמש להסרת תבנית RNA במהלך סינתזה של DNA משלים (C-DNA). | RNase H משמש להסרת תבנית RNA במהלך סינתזה של DNA משלים (C-DNA). |
| הסרת Poly-A-Tail ב-mRNA הכלאה לאוליגו (dt) | |
| RNase A אינו משמש להסרת "זנב poly-A" ב-mRNA שהוכלאה לאוליגו (dt). | RNase H משמש להסרת "זנב poly-A" ב-mRNA שהוכלאה לאוליגו (dt) |
סיכום – RNASE A לעומת RNASE H
הריבונוקלאזים הם אנזימי נוקלאז שיש להם את היכולת לפצל RNA ליחידות קטנות יותר. הם שני סוגים; אנדוריבונוקלאזים ואקסוריבונוקלאזים. אנדוריבונוקלאז הוא אנדונוקלאז בעל היכולת לפרק RNA חד-גדילי או דו-גדילי. והוא מבקע את הקשר הפוספודיסטר בתוך שרשרת פולינוקלאוטידים של RNA. RNase A ו-RNase H הם שני אנדוריבונוקלאזים. RNase A הוא ריבונוקלאז של הלבלב שמבקע באופן ספציפי שיירי ציטוזין ואורציל לא מזווגים בקצה 3' של ה-RNA החד-גדילי בריכוז מלח גבוה יותר. RNase H הוא אנזים ריבונוקלאז לא ספציפי שיכול לפרק RNA בהיברידית RNA-DNA באמצעות תגובה הידרוליטית. זה ההבדל בין RNase A ל-RNase H.
הורד את ה-PDF RNASE A לעומת RNASE H
ניתן להוריד את גרסת ה-PDF של מאמר זה ולהשתמש בה למטרות לא מקוונות לפי הערת ציטוט. אנא הורד כאן גרסת PDF ההבדל בין RNASE A ל-RNASE H
