ההבדל העיקרי בין פלואורסצנטי חיסוני ישיר לעקיף הוא שהאימונופלואורסצנטי הישיר משתמש בנוגדן יחיד שפועל נגד היעד המעניין בעוד שהאימונופלואורסצנטי העקיף משתמש בשני נוגדנים כדי לתייג את היעד המעניין.
Immunofluorescence או הדמיית תאים היא טכניקה המשמשת לתיוג אנטיגן יעד ספציפי עם פלואורופור. כאן, הפלואורופור הוא תרכובת כימית ניאון שיכולה לפלוט מחדש אור עם עירור אור. כאשר פלואורופור נקשר עם אנטיגן המטרה, הוא מאפשר זיהוי של מולקולת המטרה בדגימה. כדי לתאר זאת עוד יותר, כאשר אנטיגן נקשר עם נוגדן ספציפי, ניתן לחבר אותו עם פלואורופורים.לפיכך, קל לזהות את נוכחותו של אנטיגן המטרה בדגימה בעת תצפית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
חוץ מזה, ישנם שני סוגים של חיסון פלואורסצנטי; אימונופלואורסצנטי ישיר ועקיף. ההבדל בין אימונופלואורסצנטי ישיר לעקיף טמון בעיקר במספר הנוגדנים בשימוש ובצימוד הפלואורופור. כלומר, באימונופלואורסצנטי ישיר, הפלואורופור מצמיד ישירות לנוגדן הראשוני בעוד שבאימונופלואורסצנטי עקיף, הפלואורופור מצומד עם הנוגדן המשני.
מהי אימונופלואורסצנטי ישיר?
Immunofluorescence משתמש בנוגדנים כדי לזהות אנטיגנים יעד ספציפיים. אימונופלואורסצנטי ישיר הוא אחד משני סוגי החיסון. באימונופלואורסצנטי ישיר, נוגדן יחיד (נוגדן ראשוני) מעורב והפלואורופור מצומד ישירות עם הנוגדן הראשוני. לאחר קשירת הנוגדן לאנטיגן היעד, הפלואורופור פולט פלואורסצנטי שניתן לזהות על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
איור 01: אימונופלואורסצנטי ישיר
עם זאת, אימונופלואורסצנטי ישיר היא שיטה יקרה מכיוון שהנוגדנים המצומדים הראשוניים יקרים בהשוואה לנוגדנים המשניים. עם זאת, זה לא כרוך בשלב נוסף ומכאן, טכניקה קצרה יותר. יתר על כן, קשרים לא ספציפיים מופחתים באימונופלואורסצנטי ישיר. לפיכך, תגובתיות צולבת של מינים נמוכה. אבל בזיהוי, הרגישות של החיסונית הישירה חלשה בהשוואה לאימונופלואורסצנטי העקיף.
מהי אימונופלואורסצנטי עקיף?
אימונופלואורסצנטי עקיף הוא הסוג השני של האימונופלואורסצנטי הכולל שני סוגים של נוגדנים כגון נוגדנים ראשוניים ומשניים בסימון אנטיגן המטרה.בשיטה זו, הפלואורופור מצומד עם הנוגדן המשני. לפיכך, טכניקה זו כוללת שלב נוסף.
איור 02: Immunofluorescence
עם זאת, הרגישות גבוהה בשיטה זו מכיוון שניתן לצמוד מספר פלואורפורים לנוגדנים משניים וזה מקל על הגילוי. יתר על כן, אימונופלואורסצנטי עקיף הוא זול יותר בשל העובדה שהצימוד של נוגדנים משניים פחות יקר וקל יותר. בהשוואה לאימונופלואורסצנטי ישיר, תגובתיות צולבת מינים גבוהה בשיטה העקיפה.
מהם הדמיון בין חימונופלואורסצנטי ישיר ועקיף?
- הם שני סוגים של טכניקת אימונופלואורסצנטי.
- נוגדנים ראשוניים ופלוורופור מעורבים בשתי השיטות.
- כמו כן, התגובה של אנטיגן-נוגדן מתרחשת בשתי השיטות.
- יתר על כן, גם אימונופלואורסצנטי ישיר וגם עקיף משתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי לזיהוי אנטיגן.
מה ההבדל בין אימונופלואורסצנטי ישיר ועקיף?
Immunofluorescence יכולה להיות ישירה או עקיפה בהתבסס על צימוד הפלואורופור עם הנוגדנים המשמשים. באימונופלואורסצנטי ישיר, הפלואורופור מצומד עם הנוגדן הראשוני, שהוא הנוגדן היחיד שמעורב בטכניקה זו. בניגוד לכך, באימונופלואורסצנטי עקיף, הפלואורופור מצמידים לנוגדן המשני, שהוא אחד משני סוגי הנוגדנים שמעורבים בטכניקה. מכאן שההבדל העיקרי בין אימונופלואורסצנטי ישיר לעקיפין הוא סוג הנוגדנים שמתחבר עם הפלואורופור.
האינפוגרפיקה הבאה מספקת השוואה זה לצד זה של ההבדל בין פלואורסצנטי חיסוני ישיר לעקיף.
סיכום – ישיר מול עקיף אימונופלואורסצנטי
Immunofluorescence היא טכניקה המשמשת לזיהוי נוכחות של אנטיגנים ספציפיים בדגימה. טכניקה זו משתמשת בנוגדנים ספציפיים. לכן, בכך, הנוגדנים מצומדים עם פלואורפורים כדי לזהות אותם באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. יתר על כן, ישנם שני סוגים של חיסון פלואורסצנטי, כלומר חימונופלואורסצנטי ישיר ועקיף. אימונופלואורסצנטי ישיר כולל נוגדן בודד ופלוורופור המצומדים ישירות לנוגדן זה. אימונופלואורסצנטי עקיף מערב שני נוגדנים; ראשוני ומשני ופלוורופור מצומדים לנוגדן המשני.מכיוון שמספר נוגדנים משניים יכולים להיקשר עם נוגדן ראשוני וכמה פלואורפורים יכולים להצמיד לנוגדנים משניים, אימונופלואורסצנטי עקיף היא שיטה רגישה יותר מהשיטה הישירה. יתר על כן, השיטה העקיפה פחות יקרה מהשיטה הישירה. לפיכך, זהו ההבדל בין פלואורסצנטי חיסוני ישיר לעקיף.
