ההבדל העיקרי בין GFP ל-EGFP הוא שה-GFP הוא חלבון מסוג פרא המשולב בשיבוט מולקולרי של תאים שאינם יונקים בעוד שה-EGFP הוא סוג משופר או מהונדס של GFP שניתן להשתמש בו על תאי יונקים.
שיבוט מולקולרי הוא טכניקה מתקדמת שמדענים משתמשים בה רבות בביטוי חלבונים באמצעות טכנולוגיה רקומביננטית. בטכנולוגיית DNA רקומביננטי, יש צורך להפוך וקטור רקומביננטי בהצלחה לאורגניזם מארח. לפיכך, במהלך תהליך הטרנספורמציה, יש לזהות ולאשר אם הגן המעניין עבר טרנספורמציה או לא למארח. כדי להעריך זאת, ביולוגים מולקולריים מאמצים מספר טכניקות.מתוך הטכניקות הללו, אחת מהן היא גן הכתב. גנים מדווחים אלה פועלים כסמנים הניתנים לבחירה כדי לבחור את הטרנספורמנטים הנכונים. לפיכך, חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) וחלבון ירוק פלואורסצנטי משופר (EGFP) הם שני חלבוני כתב המשמשים בשיבוט מולקולרי.
מה זה GFP?
GFP הוא חלבון מסוג פראי המכיל 238 שיירי חומצות אמינו וכמה אזורים ניתנים לבחירה של רצפי חומצות אמינו המבדילים אותו משאר החלבונים הפלורסנטים. יתר על כן, חלבון בר זה היה במקור בבידוד מ-Aequorea Victoria; סוג של מדוזה. עם זאת, בתופעות טבע, המדוזה הצליחה לייצר קרינת צבע ירוק בתגובה לגירויים מסוימים.
קודם לכן, הרעיון הזה הפתיע את המדענים, והם החליטו להשתמש בו בטכנולוגיות ה-DNA הרקומביננטי שלהם. כתוצאה מכך, מדענים השתמשו בצורה מוטנטית זו של הגן הבר כגן מדווח במחקרי ביטוי הגנים שלהם. הגן הפראי של GFP מסוגל לייצר חלבון שנותן פלואורסצנטי בטמפרטורת החדר או תחת אור UV.לכן, כאשר הוא מוכנס לתוך הטרנספורמנטים, הוא מבטא ומייצר פלואורסצנטיות. אם הקרינה נוצרת לאחר תהליך הטרנספורמציה, היא מאשרת את הצלחת תהליך השינוי. במילים פשוטות, פליטת הקרינה מסמנת את השינוי המוצלח של הווקטור הנושא את הגן המעניין אל המארח.
איור 01: GFP
בגלל סיבה זו, ה-GFP פועל כסמן in vivo של ביטוי גנים. כיום, טכניקות הנדסה גנטית נמצאות בשימוש לייצור GFP. כמו כן, זמינות גרסאות משופרות רבות של GFP כגון EGFP. לפיכך, הדבר מאפשר שימוש יעיל ב-GFP במחקרי שיבוט מולקולרי וביטוי גנים.
מה זה EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein או EGFP היא גרסה משופרת של GFP.במילים פשוטות, אנו יכולים להגדיר EGFP כגרסה מהונדסת של GFP מסוג פראי. כאשר הגן הפראי של GFP עובר מוטציה, הוא מייצר השפעות מועילות. לפיכך, הגן המוטציה של GFP מאפשר ביטוי של דמויות חדשות, וכתוצאה מכך, אנו יכולים לייצר GFP משופר עם מאפיינים משופרים. יתר על כן, אנו יכולים להכניס בהצלחה מוטציות לגן GFP מסוג פרא באמצעות הקרנה או שיטות כימיות. הגנים שעברו מוטציה אלו מייצרים את ה-EGFP, שיש לו מאפיינים מועילים יותר.
איור 02: EGFP
המאפיינים המשופרים של EGFP הם כדלקמן;
- יכולת לפלוט אותות פלואורסצנטי חזקים יותר.
- יש רגישות גבוהה.
- יכול להשתמש בו על תאי יונקים במקום פרוקריוטים ואיקריוטים אחרים ברמה נמוכה יותר.
- כמו כן, מספק טוהר מוגבר של המוצר.
לכן, בהשוואה ל-GFP, EGFP היא הבחירה המועדפת למחקרי ביטוי גנים. עם זאת, המוצר יקר יותר בהשוואה ל-GFP.
מה הם קווי הדמיון בין GFP ל-EGFP?
- GFP ו-EGFP הם שני חלבונים שיש להם את היכולת לפלוט צבע ירוק
- לכן, שניהם מתפקדים כחלבוני כתב במחקרי ביטוי גנים.
- כמו כן, אפשר לסנתז את שניהם באמצעות טכנולוגיית DNA רקומביננטי.
- יתר על כן, קל לבצע מוטציה נוספת של שני הסוגים הללו כדי לסנתז צורות משופרות.
מה ההבדל בין GFP ל-EGFP?
גן הכתב הוא גן שמתחבר לגן המעניין בטכנולוגיית DNA רקומביננטי. זה מאותת על השינוי המוצלח של הווקטור הרקומביננטי למארח.כאן, GFP ו-EGFP הם שני סוגים של חלבונים פרחוניים ירוקים שפועלים כחלבוני כתב. עם זאת, ההבדל העיקרי בין GFP ל-EGFP הוא שה-GFP הוא מסוג פראי בעוד EGFP הוא גרסה מהונדסת של GFP. יתר על כן, ל-EGFP יש מאפיינים מועילים יותר מ-GFP. לדוגמה, EGFP מייצר אור ניאון חזק יותר והוא רגיש יותר מה-GFP. הבדל נוסף בין GFP ל-EGFP הוא המערכות שבהן אנו יכולים להשתמש באלה. מערכות שאינן יונקות משתמשות ב-GFP בעוד שמערכות יונקים משתמשות ב-EGFP.
האינפוגרפיקה שלהלן מציגה את ההבדל בין GFP ל-EGFP בצורת טבלה.
סיכום – GFP לעומת EGFP
GFP ו-EGFP הם חלבוני כתב במחקרי שיבוט מולקולרי וביטוי גנים. GFP הוא חלבון הבר, שהוא חלבון ניאון ירוק.החלבון היה בתחילה בבידוד מהמדוזה Aequorea victoria. לעומת זאת, EFGP היא צורה משופרת של חלבון GFP. זהו מוטציה מסוג פראי עם מאפיינים משופרים. לפיכך, ל-EFGP יש עוצמת אות גבוהה יותר ורגישות גבוהה יותר. לכן, אנו יכולים להשתמש בו על וקטורים של יונקים. לעומת זאת, השימוש ב-GFP הוא בעיקר רק על וקטורים שאינם יונקים. בסך הכל, זה ההבדל בין GFP ל-EGFP.
