ההבדל העיקרי בין תרגום ניק למילוי קצה הוא שתרגום ניק הוא תהליך שיוצר בדיקות DNA מסומנות לתגובות הכלאה שונות, בעוד שמילוי קצה הוא טכניקה שיוצרת שברים קהים על ידי הוספת נוקלאוטידים לתליונים חד-גדילים.
תרגום ניק ומילוי סוף הן שתי טכניקות המשמשות בביולוגיה מולקולרית. תרגום ניק משמש לתיוג בדיקות להכלאה על מנת לזהות רצפי נוקלאוטידים ספציפיים. מילוי קצה משמש להכנת שברים קהים בעלי קצוות דביקים עם גדילים חד-גדילים. לשתי הטכניקות יש חשיבות רבה, והן מבוצעות באופן שגרתי במעבדות מחקר מולקולרי.
מהו תרגום ניק?
תרגום ניק היא טכניקה חשובה המשמשת להכנת בדיקות מסומנות לטכניקות ביולוגיות מולקולריות שונות כגון סתימות, הכלאה באתרו, הכלאה פלואורסצנטית באתרו וכו'. זוהי שיטת תיוג DNA במבחנה. בדיקות DNA משמשות לזיהוי רצפי DNA או RNA ספציפיים. בעזרת בדיקה מסומנת, ניתן לסמן או להמחיש פרגמנטים ספציפיים מתערובת מורכבת של חומצת גרעין. לכן בדיקות מסומנות מוכנות בטכניקות שונות. תרגום ניק היא שיטה כזו שמייצרת בדיקות מסומנות בעזרת אנזימים DNase 1 ו-DNA פולימראז 1.
איור 01: Nick Translation
תהליך תרגום ניק מתחיל בפעילות האנזים DNase 1. DNase 1 מציג חיתוכים לעמוד השדרה הפוספטית של DNA דו-גדילי על ידי ביקוע קשרי פוספודיאסטר בין נוקלאוטידים. לאחר יצירת הניק, תיווצר קבוצת OH 3′ חופשית של הנוקלאוטיד, ואנזים DNA פולימראז 1 יפעל עליה. פעילות 5' עד 3' אקסונוקלאז של DNA פולימראז 1 מסירה נוקלאוטידים מהחץ לכיוון 3' של גדיל ה-DNA.
במקביל, פעילות הפולימראז של אנזים DNA פולימראז 1 פועלת ומוסיפה נוקלאוטידים כדי להחליף את הנוקלאוטידים שהוסרו. אם הנוקלאוטידים מסומנים, ההחלפה תתרחש על ידי הנוקלאוטידים המסומנים, והיא תסמן את ה-DNA לזיהוי. לבסוף, ה-DNA המסומן החדש הזה יכול לשמש כבדיקות בתגובות הכלאה שונות.
מהו סוף מילוי?
מילוי קצה הוא טכניקה המשמשת בביולוגיה מולקולרית לייצור שברים קהים. עיכול הגבלה מייצר שברים עם תליה. ייתכן שמקטעים אלה לא יהיו תואמים לקשירה לוקטורי פלסמיד.וקטורים קהים לעתים קרובות כדי לאפשר לחבר קצוות שאינם תואמים. לכן, ניתן להקהות שברים עם תליה על ידי הוספת הנוקלאוטידים לגדיל המשלים באמצעות התליה כתבנית לפילמור. תהליך זה ידוע בשם מילוי סוף.
DNA פולימראזות כגון Klenow fragment של DNA Polymerase I ו-T4 DNA Polymerase מזרזים את מילוי הקצה. הם מוסיפים נוקלאוטידים למילוי (5′ → 3′) ולועסים בחזרה (3′ → 5′). לאחר מילוי הקצוות הדביקים, הם הופכים קהים, והם מוכנים לקשור לוקטור.
יתר על כן, ניתן להשתמש במילוי קצה כדי לתייג מולקולות DNA. עם זאת, ניתן להשתמש בו רק כדי לתייג מולקולות DNA עם קצוות דביקים. בהשוואה לתרגום ניק, מילוי קצה הוא שיטה עדינה יותר אשר לעיתים רחוקות גורמת לשבירות DNA.
מהם הדמיון בין תרגום ניק למילוי סוף?
- גם תרגום ניק וגם מילוי קצה הם טכניקות ביולוגיות מולקולריות.
- ניתן להשתמש בהם כדי לתייג בדיקות.
- שניהם במבחנה
מה ההבדל בין תרגום ניק למילוי סוף?
תרגום ניק היא טכניקה שיוצרת בדיקות מסווגות להכלאה. לעומת זאת, מילוי קצה הוא טכניקה שיוצרת שברים קהים לקשירה לוקטורים. אז זה ההבדל העיקרי בין תרגום ניק למילוי סוף. יתר על כן, תרגום ניק מחייב שימוש בפעילות אקסונוקלאז של 5' עד 3' בעוד מילוי קצה אינו מצריך פעילות אקסונוקלאז של 5' עד 3'.
האינפוגרפיקה שלהלן מציגה את ההבדלים בין תרגום ניק למילוי סוף ביתר פירוט.
סיכום – תרגום ניק לעומת מילוי קצה
תרגום ניק היא שיטה המשלבת נוקלאוטידים מסומנים רדיואקטיביים ב-DNA. הוא מסנתז בדיקות מסומנות על בסיס הפעילות של אנזימים DNase 1 ו-E. coli DNA פולימראז 1. מילוי קצה, לעומת זאת, היא טכניקה שמייצרת שברים קהים. כאשר לשברים יש קצוות דביקים (עליות חד-גדילים), יש צורך להפוך אותם לקצוות קהים על מנת להיקשר לוקטורים. מילוי קצה מוסיף נוקלאוטידים תואמים ויוצר שברי קצה קהה על מנת להפוך אותם למתאימים לקשירה. לפיכך, זה מסכם את ההבדל בין תרגום כינוי למילוי סוף.
