ההבדל העיקרי בין פליטה איזוקרטית לשיפוע הוא שפליטה איזוקרטית מתייחסת לשמירה על ריכוז קבוע בשלב הנייד, ואילו פליטת גרדיאנט מתייחסת לשמירה על ריכוז משתנה בשלב הנייד.
המונחים isocratic ו-gradient elution משמשים בכרומטוגרפיה. במהלך ריצה כרומטוגרפית, אנו משתמשים בשלב נייח, שהוא חומר שאינו נע, יחד עם שלב נייד, החומר הנע. הפליטה האיזוקרטית והגרדיאנטית מתארת את המאפיינים של השלב הנייד.
מהי התחמקות איזוקרטית?
אילוציה איזוקרטית הוא מונח המשמש בכרומטוגרפיה כאשר לשלב הנייד יש ריכוז קבוע.כאן, הריכוז של השלב הנייד קבוע לאורך כל התהליך הכרומטוגרפי. בתהליך זה, אנו יכולים לראות את רוחב השיא גדל עם זמן השמירה באופן ליניארי בכרומטוגרמה. עם זאת, זה מוביל לחסרון - הפסגות המאוחרות לפליטה מאוחרת נעשים שטוחים ורחבים מאוד. לכן, קשה לזהות את הפסגות הרחבות הללו כפסגות.
יתר על כן, בגלישה איזוקרטית, הסלקטיביות אינה משתנה בהתאם למידות העמודה. המשמעות היא שהסלקטיביות אינה תלויה בשינויים במידות העמודות. כאן, האורך והקוטר נחשבים כמידות עמודות. לכן, הפסגות נפטרות באותו סדר.
מהי גיבוי שיפוע?
elution Gradient הוא מונח המשמש בכרומטוגרפיה כאשר כאן לשלב הנייד יש ריכוז משתנה. במילים אחרות, הריכוז של השלב הנייד אינו חייב להישאר קבוע. לדוגמה, ב-HPLC, שיטת הפרדה נפוצה משתמשת בתחילה במתנול 10% ומסתיימת ב-90%, על ידי הגדלת הריכוז בהדרגה.לשלב הנייד שני מרכיבים: ממס חלש וממס חזק. ממס חלש מאפשר למומס לחלוט באיטיות בעוד שממס חזק גורם לפליטה מהירה של המומס. בכרומטוגרפיה הפוכה של פאזה הפוכה, אנו משתמשים במים כממס החלש וממס אורגני כממס החזק.
איור 01: HPLC
יתר על כן, שיטת פליטת הגרדיאנט מפחיתה את הרכיבים הנפלטים מאוחרים יותר כדי לגרום להם לחלוט מהר יותר, מה שמעניק שיא צר בכרומטוגרמה. שיטה זו משפרת את צורת השיא ואת גובה השיא גם כן. יתר על כן, בטכניקת פליטת שיפוע, סדר החלוקה משתנה עם השינויים במידות העמודות.
מה ההבדל בין אבקת איזוקרטיה להפרדה מדורגת?
המונחים isocratic ו-gradient elution משמשים בכרומטוגרפיה.אלוציה איזוקרטית ושיפוע מתארים את המאפיינים של השלב הנייד. ההבדל העיקרי בין פליטת שיפוע הוא שאלוציה איזוקרטית מתייחסת לשמירה על ריכוז קבוע בשלב הנייד ואילו פליטת שיפוע מתייחסת לשמירה על ריכוז משתנה בשלב הנייד.
בטכניקת הפליטה האיזוקרטית, רוחב השיא גדל עם זמן השמירה באופן ליניארי. עם זאת, בטכניקת elution שיפוע, השמירה של הרכיבים הנפלטים מאוחר יותר פוחתת, כך שהפליטה נעשית מהירה יותר ונותנת פסגות צרות. מלבד זאת, בגליון האיזוקרטי, הסלקטיביות אינה תלויה בממדי העמודה, אך בהוצאת גרדיאנט, הסלקטיביות משתנה עם שינוי ממדי העמודה.
הטבלה הבאה מסכמת את ההבדל בין אלוציה איזוקרטית ל-gradient.
סיכום – שחרור איזוקרטי לעומת שיפוע
פליטה איזוקרטית ופליטת גרדיאנט מתארים את המאפיינים של השלב הנייד. ההבדל העיקרי בין פליטת שיפוע הוא שאלוציה איזוקרטית מתייחסת לשמירה על ריכוז קבוע בשלב הנייד ואילו פליטת שיפוע מתייחסת לשמירה על ריכוז משתנה בשלב הנייד.
