הבדל מפתח - ישיר לעומת עקיף ELISA
מסח חיסוני מקושר אנזים (ELISA), הידוע גם בשם אנזים אימונואסאי, הוא בדיקה סרולוגית המאתרת נוגדנים בדם. הוא משמש ככלי אבחון כדי לברר האם החולה נחשף לסוג מסוים של וירוס או לגורם זיהומי אחר (אנטיגן) והאם הגוף ייצר נוגדנים נגד הזיהום. ELISA יכולה גם לזהות את הזיהומים בעבר והנוכחיים. לפיכך, ELISA משמש לעתים קרובות כבדיקת בדיקה מוקדמת על ידי הרופאים לפני ניתוח מעמיק של מחלות. בדיקה זו יכולה להתבצע במעבדה על ידי לקיחת דגימת דם מהמטופל.ישנם שני סוגים של בדיקת ELISA: ELISA ישיר ו-ELISA עקיף. ההבדל העיקרי בין ELISA ישיר לעקיף הוא ש-ELISA עקיף רגיש יותר ודורש תוספת של נוגדן משני בעוד ELISA ישיר פחות רגיש ומשתמש רק בנוגדן ראשוני.
מהי ישיר ELISA?
ELISA היא בדיקה לאבחון מחלה המתבצעת כדי לזהות נוכחות של אנטיגנים או נוגדנים מסוימים בדם. זה נעשה כבדיקת צלחת. הוא משתמש בנוגדנים הקשורים לאנזימים שנבדקו בקלות. נוכחות אנטיגנים בדגימת הסרום נקשרת לנוגדנים ספציפיים הקשורים לאנזימים. בשלב האחרון, מוסיפים מצע ספציפי שיגיב עם האנזים. האנזים הופך את המצע למוצר צבעוני או מייצר אותות. שינוי הצבע במצע הכימי חושף נוכחות של נוגדן מסוים בדגימת הסרום. בדיקת ELISA ישירה משתמשת רק בנוגדן ראשוני המקושר לאנזים. לאחר הקישור לאנטיגן, הוא משנה במהירות את הצבע, מה שמעיד על נוכחות הגורם הזיהומי בדם.עם זאת, עוצמת האותות חלשה יותר ב-ELISA ישיר מכיוון שהאפיטופים מוגבלים לקישור של האנטיגנים. לפיכך, ELISA ישיר פחות רגיש בהשוואה ל-ELISA עקיף.
איור 01: מבחן ELISA ישיר
מהי ELISA עקיף?
ELISA ניתן לבצע באמצעות שני סוגים של נוגדנים דהיינו; נוגדן ראשוני ונוגדן משני. כלי ELISA עקיף משתמש בשני סוגי הנוגדנים כדי להגביר את האותות לזיהוי טוב יותר. טכניקת ELISA עקיפה מבוצעת באופן הבא.
- צלחות מודגרות עם אנטיגנים ונשטפות כדי לחסום קישור לא ספציפי.
- לאחר מכן מוסיפים נוגדנים ראשוניים ונשטפים.
- נוגדן משני מקושר אנזים מתווספים ונשטפים.
- מוסיפים מצע ומאפשרים לו להגיב עם אנזימים.
- אותות מזוהים, ומזוהים נוכחות או היעדרו של האנטיגן הספציפי בדגימה.
בבדיקת ELISA עקיפה, מספר נוגדנים משניים יכולים להיקשר לנוגדן ראשוני יחיד. נוגדנים משניים מקושרים עם אנזימים שנבדקו בקלות. לכן, כריכה אחת יכולה ליצור אות חזק עקב יותר מאינטראקציה אחת. לפיכך, ELISA עקיף רגיש יותר מ-ELISA ישיר. עם זאת, ELISA עקיף יכול ליצור אותות לא ספציפיים עקב תגובות צולבות של הנוגדנים המשניים.
איור 02: מבחן ELISA עקיף
מה ההבדל בין ELISA ישירה לעקיפה?
ישירה מול עקיפה ELISA |
|
| Direct ELISA פחות רגיש בהשוואה ל-ELISA עקיף. | אליזה עקיפה רגישה יותר. |
| זמן נלקח | |
| בדיקת ELISA ישירה היא תהליך מהיר. | ELISA עקיף גוזל זמן. |
| שימוש בנוגדנים | |
| רק סוג אחד של נוגדנים (נוגדנים ראשוניים) משמשים ב-ELISA ישיר. | נוגדנים ראשוניים ומשניים משמשים עבור ELISA עקיף. |
| קישור עם אנזימים | |
| נוגדנים ראשוניים מקושרים עם אנזימים. | נוגדנים משניים מקושרים עם אנזימים. |
| תגובתיות צולבת של נוגדנים שניים | |
| Direct ELISA מבטלת תגובתיות צולבת של נוגדנים שניים. | ELISA עקיף מושפע מתגובתיות צולבת של נוגדנים שניים. |
| אותות | |
| האותות חלשים בהשוואה ל-ELISA עקיף. | אותות מוגברים ב-ELISA עקיף. לפיכך, קל לזהות. |
סיכום – ישיר מול עקיף ELISA
ELISA היא טכניקה ביוכימית המשמשת בעיקר באימונולוגיה כדי לזהות נוכחות של נוגדן או אנטיגן בדגימת דם של מטופל. זה יכול להתבצע באמצעות שני תהליכים הידועים כ-ELISA ישיר או עקיף. בדיקת ELISA ישירה משתמשת רק בנוגדנים ראשוניים כדי לזהות את האנטיגן ואילו ELISA עקיפה משתמשת בנוגדנים ראשוניים ומשניים כאחד.ב-ELISA ישיר, נוגדנים ראשוניים מסומנים ואילו ב-ELISA עקיף מסומנים נוגדנים משניים. זה ההבדל בין ELISA ישיר לעקיף.
