ההבדל העיקרי בין בדיקת BCA ל-Bradford הוא שבדיקת BCA גוזלת זמן ופחות מדויקת, בעוד שבדיקת ברדפורד היא מהירה ומדויקת.
BCA ו-Bradford Assay הן שתי שיטות בדיקה לקביעת ריכוז חלבון. לשני המבחנים הללו יש עקרונות בדיקה שונים והבדלים בדיוק שלהם.
מהו BCA Assay?
בדיקת BCA או בדיקת חומצה ביצינצ'ונינית היא בדיקה ביוכימית שימושית בקביעת הריכוז הכולל של חלבון בתמיסה. שיטה זו נקראת גם כ-Smith assay על שם הממציא שלה, Paul K. Smith. שיטה אנליטית זו מראה קווי דמיון לבדיקת חלבון Lowry, בדיקת חלבון ברדפורד או מגיב ביורט.אנו יכולים לראות את ריכוז החלבון הכולל בדגימה נתונה באמצעות שינוי צבע של תמיסת הדגימה, שעובר מירוק לסגול. שינוי צבע זה מתרחש ביחס לתכולת החלבון. לאחר מכן נוכל להשתמש בטכניקה קולורימטרית כדי לנתח את עוצמת הצבע ותכולת החלבון בדגימה.
BCA שיטת הערכת חלבון
כאשר בוחנים את המנגנון של בדיקת BCA, תמיסת BCA טיפוסית מכילה תמיסה בסיסית ביותר עם pH של כמעט כ-11.25, והמרכיבים בתמיסה זו כוללים חומצה ביצינצ'ונינית, נתרן קרבונט, נתרן ביקרבונט, נתרן טרטרט, ו נחושת (II) סולפט פנטהידרט. בדיקה זו תלויה בעיקר בשתי תגובות כימיות: הפחתת נחושת(II) לנחושת(I) על ידי קשרי הפפטידים בחלבון וקלציה של שתי מולקולות של חומצה ביצינצ'ונינית עם יון נחושת(I), וכתוצאה מכך נוצר קומפלקס בצבע סגול שיכול לספוג אור באורך גל של 562 ננומטר. בתגובה הראשונה, כמות הנחושת(II) המופחתת על ידי קשרי פפטיד היא פרופורציונלית לכמות החלבון בדגימה.
מה זה Bradford Assay?
מבחן ברדפורד הוא שיטה אנליטית ספקטרוסקופית שימושית למדידת ריכוז החלבון בתמיסה. שיטה זו פותחה על ידי Marion M. Bradford בשנת 1976, וזו שיטה מהירה ומדויקת יחסית.
תגובת צבע של חלבון וריאגנט ברדפורד
נוכל להשתמש בשיטה זו כדי לקבוע את ריכוז כמות החלבון בדגימה. התגובה הכימית המתרחשת בדגימה במהלך בדיקה זו תלויה אך ורק בהרכב חומצות האמינו של החלבון בדגימה.
שיטת ברדפורד לאומדן חלבון
כאשר בוחנים את השיטה של בדיקה זו, זהו בדיקת חלבון קולורימטרית המבוססת על שינוי הספיגה של הצבע בשם Coomassie Brilliant Blue G-250. באופן כללי, צבע זה קיים בשלוש צורות כצורה אניונית (כחול), צורה ניטרלית (ירוקה) וצורה קטונית (אדום). לכן, בתנאים חומציים, הצבע משנה את צבעו מאדום לכחול. זה בגלל הקישור של החלבון עם הצבע. לעומת זאת, אם אין חלבון שייקשר עם הצבע, שינוי הצבע לא מופיע, התמיסה מקבלת צבע אדום-חום. צבע זה מסוגל ליצור קומפלקס חזק ולא קוולנטי עם קבוצת הקרבוקסיל של החלבון באמצעות כוחות ואן דר ואל ומשיכה אלקטרוסטטית.
מה ההבדל בין BCA ל-Bradford Assay?
BCA ו-Bradford Assay הן שתי שיטות בדיקה לקביעת ריכוז חלבון. לשני המבחנים הללו יש עקרונות שונים של בדיקה והבדלים בדיוק שלהם. ההבדל העיקרי בין בדיקת BCA ל-Bradford הוא שבדיקת BCA גוזלת זמן ופחות מדויקת, בעוד שבדיקת ברדפורד היא מהירה ומדויקת.
האינפוגרפיקה הבאה מסכמת את ההבדלים בין בדיקת BCA ל-Bradford בצורת טבלה.
סיכום – BCA vs Bradford Assay
בדיקת BCA או בדיקת חומצה ביצינצ'ונינית היא בדיקה ביוכימית שימושית בקביעת הריכוז הכולל של חלבון בתמיסה. מבחן ברדפורד הוא שיטה אנליטית ספקטרוסקופית שימושית למדידת ריכוז החלבון בתמיסה. ההבדל העיקרי בין בדיקת BCA ל-Bradford הוא ש-BCA לוקח זמן ופחות מדויק, בעוד שבדיקת ברדפורד היא מהירה ומדויקת.
