ההבדל העיקרי בין בדיקת מיקרו-גרעין לבדיקת שביט הוא שבדיקת מיקרו-גרעין חשובה לבדיקת נזק כרומוזומלי כתוצאה מחשיפה למוטגנים, בעוד שבדיקת שביט חשובה כדי לזהות נזק ראשוני ל-DNA בתאים בודדים.
מבחני גנוטוקסיות עוזרים להעריך את האפשרויות של מוטציות וחריגות כרומוזומליות. גנוטוקסינים כוללים חומרים כימיים וקרינה. חומרים מסרטנים, מוטגנים וטרטוגנים הם הקטגוריות העיקריות של גנוטוקסינים. הם גורמים לנזקים שונים כמו מוטציות נקודתיות, מחיקות, הפסקות גדילים בודדים וכפולים, סטיות כרומוזומליות, תצורות מיקרו-גרעינים, תיקון DNA ואינטראקציות עם מחזור התא.מצבים כאלה עשויים להוביל למגוון רחב של מחלות, ומבחני גנוטוקסיות מונעים את הנזק הפוטנציאלי ממצבים אלה. בדיקת מיקרו-גרעין ובדיקת שביט הן שתי טכניקות תחת מבחני גנוטוקסיות.
מהו בדיקת מיקרונוקלוס?
בדיקת מיקרונוקלוס היא בדיקה להערכת נזק כרומוזומלי כתוצאה מחשיפה למוטגנים. זה חשוב בהקרנת כימיקלים הגורמים להיווצרות ציר ומיקרו-גרעינים. בדיקת מיקרו-גרעין מספקת מידע על יציבותם של כימיקלים כאשר הם מפריעים למבנה ולתפקוד הכרומוזומים. חומרים מסרטנים רבים נבחנים חיוביים במבחני מיקרו-גרעין. תהליך הבדיקה כולל טיפול כימי ומדידת התדירות של תאים מיקרו-גרעיניים. אם יש עלייה חריגה במספר תאי המיקרו-גרעינים, היא מגיעה למסקנה שהכימיקל גורם לנזק כרומוזומלי.
בדיקת מיקרו-גרעין מבוצעת בדרך כלל על תאים המתחלקים באופן פעיל. לכן, אריתרוציטים ותאי גזע של מח עצם המיוצרים באמצעות חלוקת תאים הם מועמדים אידיאליים למבחנים כאלה.הם חווים תחלופה קבועה ומהירה. מכיוון שלאריתרוציטים אין גרעינים אמיתיים, זה הופך את התאים המיקרו-גרעיניים לגלויים יותר בסוף הבדיקה.
איור 01: תצפית בדיקת מיקרו-גרעין
מבחני מיקרו-גרעין הם חסכוניים, מהירים יותר, נוחים ודורשים פחות מיומנויות לביצוע. הם משקפים סטיות כרומוזומליות במהירות בצורה אמינה ושימושיים ביותר להערכת נזקים כרומוזומליים במהירות. סוג מיוחד ורב-תכליתי של בדיקת מיקרו-גרעין הוא בדיקת ציטוקינזיס בלוק מיקרו-נוקלאוס (CBMNcyt). זהו המבחן המועדף למדידת נזק כרומוזומלי וחוסר יציבות בתאים. עם זאת, הבעיה העיקרית בשימוש בבדיקת מיקרו-גרעין היא שהוא אינו מסוגל לקבוע סוגים שונים של סטיות כרומוזומליות, ולבדיקה יש השפעה על הקצב המיטוטי ושיעור המוות של התא, מה שגורם לתוצאות להשתנות.
מה זה Comet Assay?
assay Comet, המכונה גם בדיקת אלקטרופורזה ג'ל בודד, היא טכניקה פשוטה ורגישה לזיהוי נזק ל-DNA. הוא מודד את שברי ה-DNA בתאים איקריוטים ומהווה טכניקה סטנדרטית לניטור ביולוגי ובדיקות גנוטוקסיות.
מבחן השביט מעורב בכינוס של תאים בתרחפי אגרוז עם נקודת התכה נמוכה, תמוגה של תאים בתנאים ניטרליים או אלקליין, ואלקטרופורזה של תאים מרחפים. במהלך תהליך האנקפסולציה, התאים תלויים באגרוז מותך בנקודת התכה נמוכה, והאגרוז יוצר מטריצה של סיבי פחמימה כדי לעגן אותם במקומם. אגרוז הוא ניטרלי מבחינה אוסמטית; לכן, הוא מאפשר לתמיסות לחדור דרך הג'ל ולהשפיע על התאים מבלי להפריע ולהזיז אותם. תמיסת הליסיס היא תמיסת מלח מימית וחומר ניקוי בריכוז גבוה. מלח זה משבש חלבונים ודפוסי הקשר בתוך התא תוך שיבוש תכולת ה-RNA של התא.התאים הורסים, וכל החלבונים, ה-RNA, המרכיבים הציטופלסמיים והנוקלאופלזמיים, משבשים ומתפזרים לתוך מטריצת האגרוז, ומשאירים את ה-DNA.
איור 02: Comet Assay
תמיסת האלקטרופורזה היא תמיסה אלקלית שבה הסליל הכפול של ה-DNA מתהפך, והנוקלואיד הופך ליחיד גדילי. במהלך תהליך זה מופעל שדה חשמלי לניתוח התמונות. ניתוח התמונה מודד את העוצמה הכוללת של הקרינה עבור ה-DNA והנוקלואיד ומשווה בין השניים. המבנה הכללי דומה לשביט עם ראש עגול המקביל ל-DNA הנותר שנותר וזנב ל-DNA הפגוע. ככל שהזנב בהיר וארוך יותר עקב אותות חזקים יותר, כך רמת הנזק גבוהה יותר.
מהם הדמיון בין מיקרו-גרעין לבדיקת שביט?
- Micronucleus ובדיקת השביט חסכוניים, מהירים יותר, נוחים ודורשים פחות מיומנויות.
- הם מבוצעים בעיקר על DNA.
- שני המבחנים עוזרים להעריך מוטציות וחריגות כרומוזומליות.
- יתר על כן, שתי הטכניקות משתמשות בכימיקלים לביצוע ההליך.
מה ההבדל בין מיקרו-גרעין ל-Comet Assay?
בדיקת המיקרו-גרעין חשובה בבדיקת נזק כרומוזומלי כתוצאה מחשיפה למוטגנים, בעוד שבדיקת שביט חשובה בזיהוי נזק ראשוני ל-DNA בתאים בודדים. לפיכך, זהו ההבדל העיקרי בין מיקרו-גרעין לבדיקת שביט. כמו כן, בדיקת המיקרו-גרעין מבוססת היטב כדי לזהות קלסטוגניות ו-aneugenicity. בדיקת השביט משמשת כבדיקת גנוטוקסיות לאיתור נזק DNA ראשוני בתאים. יתרה מכך, בדיקת מיקרו-גרעין מספקת מידע על יציבות כימיקלים, בעוד שבדיקת שביט היא אלקטרופורזה של ג'ל יחיד.
האינפוגרפיקה שלמטה מציגה את ההבדלים בין בדיקת מיקרו-גרעין ובדיקת שביט בצורת טבלה להשוואה זו לצד זו.
סיכום – Micronucleus vs Comet Assay
מבחני גנוטוקסיות עוזרים להעריך את האפשרויות של מוטציות וחריגות כרומוזומליות. בדיקת מיקרו-גרעין ובדיקת שביט הן שתי טכניקות תחת מבחני גנוטוקסיות. בדיקת Micronucleus מעריכה נזק כרומוזומלי כתוצאה מחשיפה למוטגן. בדיקת שביט היא טכניקה פשוטה ורגישה לזיהוי נזקי DNA. אז זה ההבדל העיקרי בין מיקרו-גרעין לבדיקת שביט. בדיקת מיקרו-גרעינים חשובה בבדיקת כימיקלים הגורמים להיווצרות ציר ומיקרו-גרעינים. בדיקת שביט מעורבת בקליפת תאים בתרחפי אגרוז עם נקודת התכה נמוכה, תמוגה של תאים בתנאים ניטרליים או אלקליים, ואלקטרופורזה של תאים מרחפים.
