הבדל מפתח - אימונופלואורסצנטי לעומת אימונוהיסטוכימיה
דיאגנוסטיקה של מחלות, המשתמשת בשיטות ביולוגיות מולקולריות, הפכה לתחום מתפתח בטכנולוגיית המעבדה הקלינית. הוא כולל את כל הבדיקות והשיטות לזיהוי מחלה והבנת הגורם למחלה על ידי ניתוח DNA, RNA או חלבונים מבוטאים באורגניזם. התקדמות מהירה באבחון מולקולרי אפשרה מחקר בסיסי על מחלות מדבקות ובלתי מדבקות. אלה משמשים לקביעת שינויים ברצף או ברמות הביטוי בגנים או חלבונים מכריעים המעורבים במחלה. אימונופלואורסצנטי (IF) ואימונוהיסטוכימיה (IHC) הן שתי טכניקות בשימוש נרחב בביולוגיה של סרטן. IF הוא סוג של IHC שבו נעשה שימוש בשיטת זיהוי פלואורסצנציה לניתוח נוגדנים חד שבטיים ופוליקלונליים, בעוד IHC משתמש בשיטות מבוססות כימיות כדי לזהות את הנוגדנים החד שבטיים והפוליקלונליים. זה ההבדל העיקרי בין IF ל-IHC.
מהי Immunofluorescence (IF)?
Immunofluorescence היא טכניקת זיהוי שבה הנוגדנים המשמשים בבדיקה מסומנים באמצעות צבעים ניאון או חלבונים פלואורסצנטיים למטרת הזיהוי. נוגדנים משניים מסומנים יכולים לגרום לאותות רקע לא רצויים; לכן, טכניקת IF מבוססת על תיוג של הנוגדן הראשוני עצמו כיום על מנת למנוע אותות לא רצויים במהלך הגילוי. באמצעות טכניקה זו, נמנעת קישור לא ספציפי בין הנוגדן הראשוני והמשני, והיא מהירה יותר מכיוון שאין שלב דגירה משני מעורב. גם איכות הנתונים השתפרה.
איור 01: צביעה אימונופלואורסצנטית כפולה עבור BrdU, NeuN ו-GFAP
פלואורכרומים או צבעים פלורסנטים הם תרכובות שיכולות לספוג קרינה, רצוי קרינה אולטרה סגולה הנרגשת. כאשר החלקיקים מגיעים למצב הקרקע מהמצב הנרגש, הם פולטים קרינה שנלכדת ומתגלה על ידי גלאי ליצירת ספקטרום. ישנה חשיבות רבה לכך שהתווית הפלורסנטית תהיה תואמת ויציבה לתגובה המסוימת והיא צריכה להיות מצומדת כראוי לנוגדן על מנת לקבל תוצאות מדויקות. אחד הפלואורוכרומים הנפוצים ביותר הוא פלואורססין איזותיוציאנט (FITC), שצבעו ירוק, עם אורכי גל ספיגה ופליטת שיא של 490 ננומטר ו-520 ננומטר, בהתאמה. Rhodamine, חומר נוסף המשמש ב-IF, הוא בצבע אדום ובעל אורכי גל ספיגה ופליטה ברורים של 553 ננומטר ו-627 ננומטר.
מהי אימונוהיסטוכימיה (IHC)?
IHC היא שיטת בדיקה מולקולרית המתורגלת במטרה לזהות ולאשר את נוכחות האנטיגן בתא המטרה. תא המטרה יכול להיות חלקיק זיהומי, פתוגן מיקרוביאלי או תא גידול ממאיר. IHC משתמש בנוגדנים חד שבטיים ופוליקלונליים כדי לקבוע את נוכחותם של אנטיגנים הנמצאים על פני התא של תאי המטרה. הטכניקה מבוססת על קשירת אנטיגן-נוגדנים. סמן זיהוי מצומד לנוגדנים אלו על מנת לזהות את נוכחותו או היעדרו של האנטיגן המסוים. סמנים אלו יכולים להיות סמנים כימיים כגון אנזימים, נוגדנים מתויגים פלואורסצנטי או נוגדנים המסומנים ברדיו.
איור 02: פרוסת מוח-עכבר מוכתמת על ידי אימונוהיסטוכימיה
היישום הפופולרי ביותר של IHC הוא בביולוגיה של תאים סרטניים כדי לזהות נוכחות של גידולים ממאירים, אך הוא משמש גם לאיתור מחלות זיהומיות.
מהם הדמיון בין אימונופלואורסצנטי לאימונוהיסטוכימיה?
- אימונופלואורסצנטי ואימונוהיסטוכימיה מתרחשים בתנאי מבחנה.
- שתי הטכניקות מבוססות על האנטיגן-נוגדן
- שתיהן טכניקות מהירות מאוד.
- ניתן לשחזר את התוצאות של הטכניקות.
- שניהם שיפרו את איכות הנתונים.
- טכניקות אלו המשמשות באבחון לסרטן ומחלות זיהומיות.
מה ההבדל בין אימונופלואורסצנטי לאימונוהיסטוכימיה?
Immunofluorescence לעומת אימונוהיסטוכימיה |
|
| IF היא טכניקת זיהוי שבה הנוגדנים המשמשים בבדיקה מסומנים באמצעות צבעים פלורסנטים או חלבונים ניאון לזיהוי. | IHC היא טכניקת זיהוי שבה הנוגדנים המשמשים בבדיקה מסומנים באמצעות כימיקלים או יסודות רדיואקטיביים לזיהוי. |
| דיוק | |
| דיוק גבוה יותר בטכניקת IF בהשוואה ל-IHC. | הדיוק נמוך יותר ב-IHC. |
| Specificity | |
| IF הוא יותר ספציפי. | IHC פחות ספציפי. |
סיכום – אימונופלואורסצנטי לעומת אימונוהיסטוכימיה
מנגנונים מולקולריים חוללו שינויים רבים בתחום הרפואה, והולידו שיטות בדיקה מולקולריות מתקדמות אשר חוללו מהפכות בתחום הדיאגנוסטיקה.המצאות אלו הובילו לזיהוי ואישור מהיר ומדויק של המחלה, ובכך אפשרו מתן וייצור מוצלחים של תרופות. טכניקות אלו משמשות גם בפרמקולוגיה על מנת למצוא את מטרות התרופות ולאשר את התכונות הפרמקוקינטיות של התרופה במהלך חילוף החומרים של התרופה. IF ו-IHC הן שתי שיטות אבחון המבוססות על הרעיון של קשירת אנטיגן ונוגדנים, אם כי אופן הגילוי בשתי הטכניקות שונה. IF משתמש בעקרון הקרינה כדי לזהות את האנטיגן ו-IHC משתמש במושג של צימוד כימי כדי לזהות את האנטיגן. זה ההבדל בין IF ל-IHC.
הורד גרסת PDF של Immunofluorescence לעומת Immunohistochemistry
ניתן להוריד את גרסת ה-PDF של מאמר זה ולהשתמש בה למטרות לא מקוונות לפי הערת ציטוט. אנא הורד כאן גרסת PDF ההבדל בין אימונופלואורסצנטי לאימונוהיסטוכימיה.
