הבדל בין טריפסיניזציה חמה לקרה

2024 מְחַבֵּר: Alex Aldridge | [email protected]. שונה לאחרונה: 2023-12-17 13:39

הבדל מפתח - טריפסיניזציה חמה לעומת קרה

טריפסיניזציה חמה וקרה הן שתי שיטות המשמשות לפירוק אנזימטי של תאים בגידול תאים בבעלי חיים. ההבדל העיקרי בין טריפסיניזציה חמה לקרה, כפי שהשמות מרמזים, תלוי בטמפרטורה שבה מוסיפים את הטריפסין לצורך פירוק תאי. טריפסיניזציה חמה מתרחשת בתנאי טמפרטורה גבוהים יותר (36.5 - 37 ^{0C) ואילו טריפסיניזציה קרה מתרחשת בתנאי טמפרטורה נמוכה.}

במהלך תהליך גידול תאים ראשוני של תאי בעלי חיים, ישנן שלוש שיטות עיקריות המשמשות והוכחו כמוצלחות.שלוש השיטות כוללות פירוק מכני של תאים, פירוק אנזימטי של תאים וטכניקת ההשתלה העיקרית. הפירוק האנזימטי של התאים המוביל לבידוד התאים והוא נעשה על ידי האנזים טריפסין מפרק החלבון. לכן, תהליך זה ידוע בשם טריפסיניזציה. טריפסיניזציה יכולה להיעשות בשני תנאים שונים, כלומר טריפסיניזציה חמה וטריפסיניזציה קרה. טריפסיניזציה חמה היא השיטה לטיפול בתאים בטריפסין בתנאים חמים בטמפרטורה של 36.5 – 37 ^{0C. טריפסיניזציה קרה הוא תהליך הטיפול בטריפסין המתרחש בתנאים קרים יותר, רצוי בקרח השומר על טמפרטורות נמוכות מאוד.}

מהו טריפסיניזציה חמה?

ניתן לעשות טריפסיניזציה כדי לפרק את הרכיבים התאיים על מנת לבודד את התאים כדי לייצר תרבית תאים ראשונית. טריפסין הוא אנזים פירוק חלבון, ותערובת האנזים המשמשת בטריפסיניזציה יכולה להיות תמצית גולמית או מוצר מטוהר.אומרים שהתמצית הגולמית יעילה יותר בתמוגת חלבון ופירוק תאים מכיוון שהיא מכילה אנזימים מתכלים אחרים.

טריפסיניזציה חמה היא השיטה האנזימטית הנפוצה ביותר לפירוק תאים המתרחשת בתנאי טמפרטורה גבוהים יותר. לפני הטיפול בטריפסיניזציה קוצצים את הרקמה הרצויה לחתיכות קטנות יותר. זה מקל על תהליך הפירוק הקל. לאחר מכן הרקמה הקצוצה נשטפת במדיה מיוחדת המכונה מדיום Dissection Basal S alt.

עם השלמת שלב הכביסה, התאים הופכים לבקבוק המכיל את האנזים הפעיל, שהוא טריפסין. מכיוון שטכניקה זו מרמזת על פרוטוקול טריפסיניזציה חם, הטריפסין ממוקם בטמפרטורה של כ-37 ^{0C למשך כארבע שעות.}

איור 01: Trypsin

התוכן מעורבב ומעורב באמצעות שיטות צנטריפוגה לצורך קלות הפרוטוקול וכדי להאיץ את תהליך הפירוק. לאחר השגת הזמן המומלץ, ניתן להפיק את התאים מהסופרנטנט. התאים שמקורם מהסופרנטנט מודגרים בטמפרטורה ובזמן מסוימים.

מה זה טריפסיניזציה קרה?

טריפסיניזציה קרה היא הסוג השני של טריפסיניזציה המתרחשת בתנאי קור. בטכניקה זו, התאים הנקוצצים ונשטפים מונחים בבקבוקונים על קרח ולאחר מכן מושרים בטריפסין. תקופת ההשריה ארוכה בהרבה – כ-6 – 24 שעות.

לאחר השלמת הליך ההשריה, הטריפסין מוסר מהליסאט של התא, וחתיכות הרקמה מודגרות עוד יותר ב-37 ^{0C למשך כ-20 - 30 דקות. פירוק התאים מתבצע על ידי פיפטציה חוזרת ונשנית של תערובת הרקמה.זה יאפשר לתאים להתנתק מהממברנה ולהגיע לסופרנטנט. ברגע שהתאים נמצאים בסופרנטנט, הם מודגרים ומגדלים אותם בטמפרטורה ובתקופת זמן רצויים.}

לשיטת הטריפסיניזציה הקרה יש כמה יתרונות

תשואה גבוהה יותר של תאים ברי קיימא ככל שהנזק לתאים ממוזער. הנזק לתא ממוזער על ידי אי שימוש בצעדי צנטריפוגה.
שיטה נוחה ביותר.
פחות מייגע.

המגבלה העיקרית של שיטת הטריפסיניזציה הקרה היא שלא ניתן להשתמש בכמויות גדולות במקרה אחד.

מהם הדמיון בין טריפסיניזציה חמה לקרה?

גם תהליכי טריפסיניזציה חמים וגם קרים משתמשים באנזים טריפסין לפירוק תאים.
גם תהליכי טריפסיניזציה חמים וגם קרים משמשים בהליכי תרבית תאים לפירוק תאים.
בהליכי טיפול טריפסיניזציה חמה וגם קרה, התאים נגזרים מהסופרנטנט.

מה ההבדל בין טריפסיניזציה חמה לקרה?

טריפסיניזציה חמה לעומת קרה
טריפסיניזציה חמה היא השיטה לטיפול בתאים בטריפסין בתנאים חמים בטמפרטורה של 36.5 – 37 ^0.	טריפסיניזציה קרה הוא תהליך הטיפול בטריפסין המתרחש בתנאים קרים יותר, רצוי בקרח השומר על טמפרטורות נמוכות מאוד.
פרוטוקול
חתיכות הרקמה הקצוצות נשמרות ב-37 ^{0C ברציפות לאורך ההליך.}	חתיכות הרקמה הקצוצות נשמרות בתחילה בטמפרטורות קרות כקרח ולאחר מכן נשמרות ב-37 ^0.
טמפרטורה
טריפסיניזציה חמה מתרחשת ב-36.5 – 37 ⁰	טריפסיניזציה קרה מתרחשת בטמפרטורות קרות כקרח.
זמן נצרך
פחות זמן נדרש לכל התהליך (בסביבות 4 שעות) של טריפסיניזציה חמה.	נדרש זמן ארוך יותר (בסביבות 6 - 24 שעות) לטריפסיניזציה קרה.
תשואה של תאים חיים
טריפסיניזציה חמה נמוכה.	גבוה בטריפסיניזציה קרה.
שימוש בצנטריפוגה
נדרשת צנטריפוגה לפירוק תאים בטריפסיניזציה חמה.	אין צורך בצנטריפוגה בטריפסיניזציה קרה.
כמות הרקמות הראשונית ל-Trypsinization
ניתן להשתמש בכמות גדולה יותר של רקמה בטריפסיניזציה חמה.	ניתן להשתמש בכמות קטנה יותר של רקמה בטריפסיניזציה קרה.
נזק לתא
גבוה עקב צנטריפוגה בטריפסיניזציה חמה.	פחות עקב טריפסיניזציה קרה.

סיכום – טריפסיניזציה חמה לעומת קרה

Trypsinization היא שיטת השימוש באנזים טריפסין מפרק החלבון לפירוק והכנה של תרביות תאים ראשוניות במהלך תהליך גידול התא. ישנן שתי טכניקות עיקריות של טריפסיניזציה המבוססות על הטמפרטורות המשמשות במהלך ההליך. הם טריפסיניזציה חמה וקרה. טריפסיניזציה חמה מתבצעת ב-37 ^{0C ואילו טריפסיניזציה קרה מתבצעת בתנאים קרים כקרח.למרות שטריפסיניזציה קרה לוקח זמן רב יותר להשלמה, אומרים שיש לה תשואה גבוהה יותר של תאים ברי קיימא. זה נובע מהעובדה שנזק לתאים ממוזער בטריפסיניזציה קרה מכיוון שהוא אינו משתמש בצעדי צנטריפוגה נמרצים. זה ההבדל בין טריפסיניזציה חמה לקרה.}