ההבדל העיקרי בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות הוא שבדיקות רדיואקטיביות הן רצפי DNA או RNA חד-גדיליים המסומנים עם איזוטופים רדיואקטיביים בעוד שבדיקות לא רדיואקטיביות הן רצפי DNA חד-גדילי או RNA המסומנים בתג כימי או תג פלורסנט.
הכלאה של חומצות גרעין היא טכניקה חשובה בביולוגיה מולקולרית, במיוחד באבחון מיקרוביאלי. זה עוזר לזהות או לזהות רצף חומצות גרעין מסוים. בטכניקה זו, חומצות גרעין מקובעות למשטח מוצק ומכלאות עם בדיקה. בדיקה היא קטע של DNA או RNA המשלים לרצף של עניין.אם רצף המטרה קיים בדגימה, הבדיקה תכלאה איתה ותהפוך אותה לניתנת לזיהוי. ישנם שני סוגים של בדיקות כמו בדיקות רדיואקטיביות ולא רדיואקטיביות. לכן, נוכל לתייג את הבדיקות עם תג רדיואקטיבי או תג ניאון.
מהן בדיקות רדיואקטיביות?
בדיקות רדיואקטיביות הן קטעי DNA או RNA חד-גדילי עם תג רדיואקטיבי. רדיואיזוטופים משמשים בהכנת בדיקות רדיואקטיביות. רדיואיזוטופים 32P, 33P ו-35S משמשים בדרך כלל בתיוג של בדיקות. יתרה מכך, רדיואיזוטופים 3H ו-1251 משמשים גם הם במידה פחותה בתיוג של בדיקות. אבל הם משמשים ליישומים ספציפיים. מבין הרדיואיזוטופים השונים, 32P הוא האיזוטופ הנפוץ ביותר בסימון בדיקות רדיואקטיביות.
בדיקות רדיואקטיביות מספקות רמה גבוהה יותר של מהימנות וסגוליות. לכן, הם מספקים רגישות מרבית ומאפשרים כימות מדויק של רצפי מטרה.עם זאת, ישנם מספר חסרונות הקשורים לבדיקות רדיואקטיביות. יש להם מחצית חיים קצרים. יתרה מכך, הם מסוכנים וייצור, שימוש וסילוק בעייתיים בעת הטיפול. בנוסף, הכנת בדיקה רדיואקטיבית היא תהליך יקר. לכן, בשל בעיות הבטיחות והעלות, בדיקות רדיואקטיביות אינן משמשות כיום כבדיקות לא רדיואקטיביות.
מהן בדיקות לא רדיואקטיביות?
בדיקות לא רדיואקטיביות הן הסוג השני של בדיקות המסומנות כימית. Digoxigenin הוא בדיקה לא רדיואקטיבית, שהיא סמן מבוסס נוגדנים. בדיקות דיגוקסיגנין הן ספציפיות ורגישות. ביוטין הוא תווית נוספת המשמשת בהכנת בדיקה לא רדיואקטיבית. מערכות זיהוי ביוטין/סטרפטווידין ודיגוקסיגנין/נוגדנים הן הבדיקות הלא-רדיואקטיביות הנפוצות ביותר בהכלאה. יתר על כן, מערכת פרוקסידאז של חזרת היא מערכת בדיקה לא רדיואקטיבית נוספת. ברגע שהבדיקות הלא-רדיואקטיביות הללו עוברות הכלאה עם רצפי המטרה, ניתן לזהות אותן באמצעות אוטורדיוגרפיה או טכניקות הדמיה אחרות.
איור 01: הכלאה עם בדיקות לא רדיואקטיביות
בדיקות לא רדיואקטיביות משמשות לעתים קרובות יותר בהכלאה של חומצות גרעין מאשר בדיקות רדיואקטיביות. הסיבה לכך היא שבדיקות לא רדיואקטיביות אינן קשורות לחומרים מסוכנים. יתר על כן, שיטות זיהוי לא רדיואקטיביות דורשות זמני חשיפה קצרים יותר כדי לזהות את אות ההכלאה. עם זאת, השלבים המעורבים בהכלאה של DNA עם בדיקות לא רדיואקטיביות הם בדרך כלל מייגעים וגוזלים זמן. יתר על כן, פתרונות זמינים מסחרית הם יקרים.
מהם הדמיון בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות?
- בדיקות רדיואקטיביות ולא רדיואקטיביות הן שני סוגים של בדיקות המשמשות בהכלאה של חומצות גרעין.
- הם מקלים על זיהוי רצפי מטרה בדגימה.
- שני סוגי הבדיקות רגישים וספציפיים באותה מידה.
מה ההבדל בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות?
בדיקות רדיואקטיביות הן רצפי ה-DNA החד-גדילי או ה-RNA המסומנים עם איזוטופים רדיואקטיביים, בעוד שבדיקות לא רדיואקטיביות הם רצפי ה-DNA החד-גדילי או ה-RNA המסומנים בתג כימי. אז זה ההבדל העיקרי בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות. כמו כן, איזוטופים רדיואקטיביים מסוכנים. לפיכך, בדיקות רדיואקטיביות מסוכנות במידה ניכרת, בעוד שבדיקות לא רדיואקטיביות אינן מסוכנות.
יתר על כן, הבדל נוסף בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות הוא החסרונות שלהן. זמן מחצית חיים קצר והסכנות הכרוכות בייצור, בשימוש ובסילוקם הם החסרונות של שימוש בבדיקות רדיואקטיביות. מצד שני, השלבים המעורבים בהכלאה של DNA עם בדיקות לא רדיואקטיביות הם בדרך כלל מייגעים וגוזלים זמן.
למטה אינפוגרפיקה מציגה השוואות נוספות הקשורות להבדל בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות.
סיכום – בדיקות רדיואקטיביות לעומת לא רדיואקטיביות
בדיקה היא קטע של DNA או RNA המכיל רצף נוקלאוטידים המשלים לרצף העניין. על מנת לזהות את רצף המטרה, ניתן לסמן את הבדיקות באופן רדיואקטיבי, פלואורסצנטי או כימי. בדיקות נקשרות עם רצפים משלימים בדגימה. בדיקות רדיואקטיביות מסומנות עם איזוטופים רדיואקטיביים ואילו בדיקות לא רדיואקטיביות מסומנות עם ביוטין, דיגוקסיגנין או פרוקסידאז חזרת. לפיכך, זהו ההבדל העיקרי בין בדיקות רדיואקטיביות ללא רדיואקטיביות.
