ההבדל העיקרי בין מיקוד כרומטו-אלקטרי למיקוד איזואלקטרי הוא ש-chromatofocusing הוא סוג של שיטת כרומטוגרפיה של עמודים המשתמשת בשרף חילופי יונים בעוד מיקוד איזואלקטרי הוא סוג של טכניקת אלקטרופורזה המשתמשת בג'לים של שיפוע pH-משתקעים.
מיקוד כרומטי ומיקוד איזואלקטרי הן שתי טכניקות המפרידות בין חלבונים לפי הנקודות האיזואלקטריות שלהם. גם למיקוד כרומטי וגם למיקוד איזואלקטרי יש כוח פתרון גדול. כרומטופוקוס היא שיטת כרומטוגרפיה עמודה ברזולוציה גבוהה ואילו מיקוד איזואלקטרי הוא שיטת הפרדה אלקטרופורטית.יתר על כן, מיקוד כרומטו אינו משתמש בשדה חשמלי ואילו מיקוד איזואלקטרי זקוק לשדה חשמלי.
מהו כרומטיפוקוס?
Chromatofocusing הוא סוג של כרומטוגרפיה בעלת elution גבוהה המפרידה בין חלבונים לפי הבדלים בנקודה האיזואלקטרית שלהם. הוא משתמש בעמודת שרף חילופי יונים ובשיפוע pH שפותח פנימי. שלא כמו מיקוד איזואלקטרי, מיקוד כרומטי אינו כרוך בשדה חשמלי. כרומטפוקוסינג היא טכניקת טיהור רבת עוצמה שיכולה לפתור מולקולות דומות מאוד אפילו בהבדלות רק ב-0.02 יחידות pH. לכן, מיקוד כרומטו המתאים ביותר כשלב ליטוש סופי כאשר נדרשת רזולוציה גבוהה בהפרדת רכיבים דומים מאוד.
במיקוד כרומטי, הדגימה מוחלת על העמודה על ידי ערבוב שלה עם מאגר ההתחלה. חלבונים שנמצאים ב-pH מעל הנקודה האיזואלקטרית שלהם טעונים שלילי והם נשארים ליד החלק העליון של העמוד בעוד חלבונים אחרים שנמצאים ב-pH מתחת לנקודה האיזואלקטרית שלהם, נודדים במורד העמוד.החלבון עם הנקודה האיזואלקטרית הגבוהה ביותר נפלט ראשון ואילו החלבון עם הנקודה האיזואלקטרית הנמוכה ביותר נפלט אחרון מהעמוד. טכניקה זו מושפעת ממספר גורמים כגון משקעי חלבון וליניאריות של שיפוע ה-pH.
מהו מיקוד איזואלקטרי?
מיקוד איזואלקטרי היא טכניקה שמפרידה בין מולקולות שונות על סמך הנקודה האיזואלקטרית שלהן. זה ידוע גם בשם מיקוד חשמלי. טכניקה זו משמשת לעתים קרובות להפרדת חלבון בג'ל. במיקוד איזואלקטרי, הדגימה מתווספת לג'לים של שיפוע pH (IPG) משותק. ג'ל IPG הוא מטריצת ג'ל אקרילאמיד המשולבת יחד עם שיפוע pH. החלבונים נודדים לכיוון הקתודה עד שהם מוצאים את אזור ה-pH של הנקודות האיזואלקטריות שלהם. כאשר חלבון מגיע ל-pH שאין לו מטען נטו, ההגירה נפסקת ונותנת פס נייח. באופן דומה, כל חלבון נותן פס בנקודה בשיפוע ה-pH המקביל לנקודה האיזואלקטרית שלו.
איור 01: מיקוד איזואלקטרי
מיקוד איזואלקטרי הוא השלב הראשון באלקטרופורזה דו-ממדית של ג'ל. בטכניקה זו, חלבונים מופרדים תחילה לפי הנקודות האיזואלקטריות שלהם על ידי מיקוד איזואלקטרי ולאחר מכן מופרדים לפי משקלם המולקולרי באמצעות SDS-PAGE.
מהם הדמיון בין מיקוד כרומטו-אלקטרי למיקוד איזואלקטרי?
- מיקוד כרומטי ומיקוד איזואלקטרי הן שתי שיטות בעלות פתרון גבוה.
- שניהם מבוססים על הנקודה האיזואלקטרית של חלבונים.
- טכניקות אלו משתמשות בשיפוע pH.
- שני ההליכים הם אינפורמטיביים לאפיון וריאנטים של המוגלובין אנושי.
- הם יכולים לפתור מולקולות שבהן ערכי pI נבדלים ב-0.02 יחידות pH.
מה ההבדל בין מיקוד כרומטי למיקוד איזואלקטרי?
Chromatofocusing היא טכניקת כרומטוגרפיה עמודה ברזולוציה גבוהה המפרידה בין חלבונים לפי הנקודה האיזואלקטרית שלהם. לעומת זאת, מיקוד איזואלקטרי הוא טכניקה אלקטרופורטית המפרידה בין חלבונים לפי הנקודה האיזואלקטרית שלהם על ידי הפעלת שדה חשמלי לאורך שיפוע pH שנוצר בנימי. אז זה ההבדל העיקרי בין מיקוד כרומטו-פוקוס למיקוד איזואלקטרי.
הבדל נוסף בין מיקוד כרומטי למיקוד איזואלקטרי הוא שהמיקוד הכרומטי אינו כרוך בשדה חשמלי בעוד שמיקוד איזואלקטרי זקוק לשדה חשמלי.
סיכום – מיקוד כרומטי לעומת מיקוד איזואלקטרי
מיקוד כרומטי ומיקוד איזואלקטרי הן שתי טכניקות דומות בעלות יכולת רזולוציה גבוהה של מולקולות, במיוחד מולקולות דומות מאוד. כרומטופוקוס הוא טכניקת כרומטוגרפיה עמודה ברזולוציה גבוהה ואילו מיקוד איזואלקטרי הוא שיטת אלקטרופורזה. מיקוד כרומטי אינו כרוך בשדה חשמלי, בניגוד למיקוד איזואלקטרי. לפיכך, זה מסכם את ההבדל בין מיקוד כרומטי למיקוד איזואלקטרי.
