הבדל מפתח - ניטרוצלולוזה מול קרום ניילון
Blotting היא טכניקה חשובה לזיהוי רצפים ספציפיים של DNA, RNA וחלבונים מתערובות שלהם בביולוגיה מולקולרית. זה נעשה באמצעות ממברנה הנקראת כתם. ישנן טכניקות סופג שונות כגון סופג צפוני, דרומי ומערבי. בחירת ממברנה מתאימה לתהליך הספיגה צריכה להיעשות בקפידה כדי למנוע כריכה לא ספציפית ואיתור שגוי. ניטרוצלולוזה, ניילון ו-PVDF הם ממברנות נפוצות בטכניקות סופג. יש להם מאפיינים שונים. ההבדל העיקרי בין ניטרוצלולוזה לממברנת ניילון הוא שלממברנות ניטרוצלולוזות יש פוטנציאל קביעת חלבון גבוה ואילו לממברנות ניילון יש פוטנציאל גיבוי גבוה של חומצת גרעין.עם זאת, שני סוגי הממברנות נמצאים בשימוש תכוף בטכניקות סופג.
מהי ממברנה ניטרוצלולוזה?
ממברנה ניטרוצלולוזה היא מסנן ממברנה נפוץ בשימוש בטכניקות ספיגת חומצות גרעין וחלבונים. יש לו פוטנציאל קשירת חלבון גבוה. לפיכך, ממברנות ניטרוצלולוזה נמצאות בשימוש נרחב בטכניקת סופג מערבית. ממברנות ניטרוצלולוזה תואמות את כל טכניקות ההכלאה ומציגות יכולות קשירה מעולות ללא הפרעות. ממברנות ניטרוצלולוזה הינן הידרופיליות באופן טבעי. הם יוצרים אינטראקציה הידרופלית עם מולקולות ומשתקים אותן ביעילות על הממברנה. ממברנות ניטרוצלולוזה מסחריות זמינות בשני גדלי נקבוביות: 0.45 ו-0.2 מיקרומטר.
איור 01: קרום ניטרוצלולוזה בשימוש בספיגה מערבית
מהי ממברנה ניילון?
ממברנה ניילון היא סוג נוסף של קרום מסחרי המשמש בטכניקות סופג. הוא משמש לחילופין עם ממברנות ניטרוצלולוזה עבור סופג דרומי וצפוני. ממברנות ניילון הן אידיאליות עבור סופג דרום מאשר ניטרוצלולוזה בשל הזיקה הגבוהה שלהן לקישור עם DNA. בשל מספר מאפיינים ייחודיים של ממברנות ניילון, חוקרים נוהגים להשתמש בממברנות ניילון עבור ספיגה דרומית וצפונית במקום מעל קרום ניטרוצלולוזה. ממברנות ניילון מומלצות גם להפשטה וחיטוט מחדש, שלא כמו ניטרוצלולוזה.
איור 02: קרום ניילון המשמש לספיגה דרומית
מה ההבדל בין ניטרוצלולוזה לממברנה ניילון?
ניטרוצלולוזה מול ממברנה ניילון |
|
| ממברנות ניטרוצלולוזה שבירות. | ממברנות ניילון פחות שבירות. |
| Handling | |
| קשה לטפל בהם. | קל לטפל בהם. |
| בדיקה חוזרת | |
| קשה לבצע בדיקה מחדש של ממברנות ניטרוצלולוזה שאינן נתמכות. | חיטוט מחדש קל עם ממברנות ניילון. |
| תאימות עם תנאי אחסון שונים | |
| לממברנות ניטרוצלולוזה יש פחות חוזק לעמוד בתנאי אחסון שונים. | ממברנות ניילון מגיבות חזק יותר לתנאי אחסון שונים. |
| השתמש | |
| נדרש הרטבה מוקדמת. | אין צורך בהרטבה מוקדמת עבור ממברנות ניילון. |
| טבע הידרופילי | |
| ממברנות ניטרוצלולוזה הינן הידרופיליות בטבען אך הן פחות הידרופיליות ממברנות ניילון. | הם הינם הידרופיליים מאוד. |
| פוטנציאל אימוביליזציה | |
| לממברנות ניטרוצלולוזה יש פחות זיקה לחומצות גרעין. אבל יש לו זיקה גבוהה לחלבונים. | לממברנות ניילון יש פוטנציאל קישור גבוה עם חומצות גרעין מאשר לממברנות ניטרוצלולוזה. |
סיכום – ניטרוצלולוזה מול ממברנה ניילון
ממברנות ניטרוצלולוזה וניילון הן יריעות מיוחדות המשמשות בטכניקת סופג כדי לשחזר את דפוס הרצועות על הג'ל.הם מאפשרים את האפשרות לזהות רצף מסוים או חלבון מהתערובות על ידי השבתה שלהם על הממברנה. לאחר שהמולקולות השתקעו על הממברנה, ניתן להשתמש בה כמצע לניתוח הכלאה עם בדיקות מסומנות. ממברנת ניטרוצלולוזה משמשת בדרך כלל לזיהוי חלבונים בטכניקת סופג מערבית בשל זיקת הקישור הגבוהה שלה לחלבונים. ממברנות ניילון משמשות לעתים קרובות לספיגה דרומית וצפונית. זה ההבדל בין ניטרוצלולוזה לממברנת ניילון.
