הבדל מפתח - הכלאה באתרית לעומת אימונוהיסטוכימיה
אבחון סרטן ומחלות זיהומיות הוא מגמה פופולרית שבה נעשה שימוש בטכניקות חדשות מבוססות פרוטאומיקה וגנומיקה לצורך זיהוי גידולים או תאים זיהומיים, התפשטותם ואתרי התפתחות התאים וניתוח הבסיס הגנטי של רוב המדבקות והתאים המדבקים. מחלות לא מדבקות. זה יביא לעיבוד ועיצוב תרופות מדויקים ולפיתוח טיפולים מותאמים אישית למחלות. הכלאה במקום (ISH) ואימונוהיסטוכימיה (IHC) הן שתי טכניקות בשימוש נרחב בביולוגיה של סרטן, וההבדל העיקרי בין הכלאה במקום ואימונוכימיה טמון במולקולות המשמשות בהליך הניתוח.ב-ISH, בדיקות חומצת הגרעין משמשות בניתוח ואילו ב-IHC משתמשים בנוגדנים חד שבטיים ופוליקלונליים לקביעות האבחון.
מה זה הכלאה באתרו (ISH)?
הכלאה באתרו היא טכניקת הכלאה של חומצות גרעין המבוצעות ישירות על חלק או קטע של רקמה, בכל הרקמה או בתאים. הטכניקה תלויה בתיאוריה של זיווג בסיסים משלים של ווטסון קריק, וכתוצאה מכך הכלאיים של DNA-DNA או הכלאיים של DNA-RNA שיכולים לזהות גנים שעברו מוטציה או לזהות את הגן הנדרש לעניין. רצפי DNA גדילי בודד, רצפי DNA גדילי כפול, רצפי RNA גדילי בודד או רצפי אוליגונוקלאוטידים סינתטיים משמשים כבדיקות במהלך טכניקת הכלאה, ובדיקות אלו מסומנות בזרחן רדיואקטיבי בקצה ה-5' שלו לצורך הליכי זיהוי על ידי אוטורדיוגרפיה או מתויגים באמצעות צבעים ניאון.. ישנם סוגים שונים של טכניקות ISH זמינות בהתבסס על סוג הבדיקה שבה נעשה שימוש וסוג טכניקת ההדמיה שאחריה.
איור 01: פלואורסצנטי הכלאה באתר
ישנם יישומים רבים של ISH, בעיקר באבחון מולקולרי של מחלות זיהומיות על מנת לזהות נוכחות של פתוגנים ולאשר את הפתוגן באמצעות אבחון מולקולרי. הוא משמש גם בתחומי ביולוגיה התפתחותית, קריוטיפ וניתוח פילוגנטי ומיפוי פיזי של כרומוזומים.
מהי אימונוהיסטוכימיה (IHC)?
בטכניקה של IHC, המולקולה העיקרית שנותחה היא האנטיגן. במהלך IHC, נוגדנים חד שבטיים ופוליקלונליים משמשים כדי לקבוע את נוכחותם של אנטיגנים לאחר זיהום או מצב התפשטות תאים ממאירים. הטכניקה מבוססת על קשירת אנטיגן-נוגדנים, ותוויות אנזימים משמשות לטכניקה זו; יישום אחד כזה הוא ELISA (מבחן אימונוסורבנט מקושר אנזים).הסמנים יכולים להיות גם נוגדנים מתויגים פלורסנט או נוגדנים עם תווית רדיו.
איור 02: אימונוהיסטוכימיה
IHC נמצא בשימוש נרחב לזיהוי תאי סרטן. הליכי האבחון מכוונים לאנטיגנים המצויים על תאי הגידול כדי לזהות ולאפיין את הגידול. אותו הליך משולב לאבחון גורמים זיהומיים. נוגדנים חד-שבטיים ופוליקלונליים משמשים גם לניתוח מוצרי גנים שונים על-ידי הפעלת תגובת הקישור של נוגדן-אנטיגן בין החלבון הרצוי לנוגדן הסינטטי שניתן.
מהם הדמיון בין הכלאה באתר ואימונוהיסטוכימיה?
- ISH ו-IHC הן תגובות ספציפיות ביותר.
- שתי הטכניקות מדויקות ביותר.
- ניתן להשתמש בשתי הטכניקות באבחון של סרטן ומחלות זיהומיות.
- טכניקות אלו מבוצעות בסביבות סטריליות במבחנה.
- שתיהן טכניקות מהירות המספקות תוצאות ניתנות לשחזור.
- ISH ו-IHC משתמשים בשיטות זיהוי כגון תיוג רדיו וטכניקות פלואורסצנטיות.
מה ההבדל בין הכלאה במקום לאימונוהיסטוכימיה?
הכלאה באתר מול אימונוהיסטוכימיה |
|
| ISH היא טכניקת הכלאה של חומצות גרעין המבוצעות ישירות על חלק או קטע של הרקמה או על הרקמה כולה. | IHC היא טכניקה שבה נוגדנים חד-שבטיים ופוליקלונליים משמשים כדי לקבוע את נוכחותם של אנטיגנים, שהם סמני חלבון מיוחדים הממוקמים על משטחי התא. |
| סוג של מולקולות ביולוגיות מנותחות | |
| ISH מנתח חומצות גרעין. | IHC מנתח חלבונים-אנטיגנים. |
| בסיס של תגובה ביוכימית | |
| זיווג בסיסים משלים בין DNA-DNA או DNA-RNA מתרחש בטכניקה זו. | אינטראקציות אנטיגן-נוגדנים מעורבות באימונוהיסטוכימיה. |
| שיטות זיהוי מקושרות אנזים | |
| לא ניתן להשתמש בשיטות זיהוי מקושרות אנזים ב-ISH. | ניתן להשתמש בשיטות זיהוי מקושרות אנזים ב-IHC. |
סיכום – הכלאה במקום מול אימונוהיסטוכימיה
אבחון מולקולרי הן שיטות מהירות ומאשרות שניתן להשתמש בהן כדי לזהות מחלה לא מדבקת כגון סרטן או מחלה מידבקת כגון HIV או שחפת בהתבסס על הסמנים המולקולריים הקיימים על התאים ומובילים לביטוי של המחלה.סמנים מולקולריים יכולים להיות נוכחים בצורה של חלבונים מבוטאים או ברמה הגנטית המבוססת על טכניקות חדשות שונות כדי להגביר את היעילות והם פחות עמלניים, אם כי יש עלות גבוהה הכרוכה בטכניקות אלו. לפיכך ISH תלוי ביצירת DNA-DNA או DNA-RNA היברידי, ו-IHC תלוי בתגובות הספציפיות בין נוגדן לאנטיגן. זה ההבדל בין הכלאה באתרו.
הורד גרסת PDF של הכלאה במקום מול אימונוהיסטוכימיה
ניתן להוריד את גרסת ה-PDF של מאמר זה ולהשתמש בה למטרות לא מקוונות לפי הערת ציטוט. אנא הורד כאן גרסת PDF ההבדל בין הכלאה באתר ואימונוהיסטוכימיה.
