ההבדל העיקרי בין Elisa ו-Elispot הוא שאליסה היא מבחן חיסוני המקושר לאנזים שקובע את הריכוז הכולל של חלבוני האיתות המופרשים, בעוד ש-Elispot הוא מבחן אימונוסורבנטי המקושר לאנזים שמזהה תאים מפרישי ציטוקינים בודדים.
Elisa ו-Elispot הם שני מבחני אימונוסורבנט מקושרים לאנזים בשימוש נרחב ברפואה, פתולוגיה של צמחים, ביוטכנולוגיה ותעשיות פרמצבטיות שונות. בטכניקות אלו, אנליט חלבון מתגלה על ידי נוגדן המכוון נגדו. Elisa הוא הניסוי הפופולרי ביותר של אימונוסורבנט המקושר לאנזים המשמש במעבדות. מצד שני, Elispot הוא מבחן אימונוסורבנטי המקושר לאנזים שאינו בשימוש במקום אליסה אלא משמש בנוסף לאליסה במעבדות.
מה זה Elisa Assay?
Elisa הוא מבחן אימונוסורבנטי המקושר לאנזים הקובע את הריכוז הכולל של חלבוני האיתות המופרשים. זהו מבחן ביוכימיה אנליטית בשימוש נרחב שתואר לראשונה על ידי Engvall ו-Perlmann בשנת 1971. טכניקה זו משתמשת בשיטת בדיקה חיסונית של אנזים מסוג פאזה מוצקה כדי לזהות נוכחות של חלבון ספציפי בדגימה נוזלית באמצעות נוגדנים המכוונים נגד חלבון ספציפי זה. בדיקה זו היא כלי אבחון נפוץ ברפואה, פתולוגיה של צמחים וביוטכנולוגיה.
מנגנון של מבחן ELISA
ברוב בדיקת ה-ELISA, כמות לא ידועה של אנטיגן משותקת על תומך מוצק (צלחת מיקרוליטר) בהתחלה. לאחר מכן מורחים את הנוגדן הראשוני התואם על משטח התמיכה המוצק. נוגדן זה יוצר קומפלקס עם האנטיגן (קומפלקס אנטיגן-נוגדנים). ניתן לזהות את הנוגדן הראשוני הקשור לאנטיגן על ידי נוגדן משני המקושר לאנזים באמצעות צימוד ביולוגי.בשלב האחרון של בדיקת אליסה מוסיפים חומר המכיל את הסובסטרט של האנזים. אם יש קשירה תקינה של נוגדן ראשוני לאנטיגן, נוצר שינוי צבע הניתן לזיהוי על ידי המצע. בסופו של דבר, זה מכמת את האנטיגן בדגימה.
איור 01: סוגים שונים של אליסה
יתר על כן, ישנן גישות שונות לאליסה, כמו אליסה ישירה ואליסה עקיפה. נכון לעכשיו, בדיקות Elisa שונות משמשות לאיתור פתוגנים אנושיים כמו Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, וירוס הפטיטיס B, וירוס הפטיטיס C, enterotoxin המייצר E.coli, HIV ו-SARS-CoV-2.
מהו Elispot Assay?
Elispot הוא מבחן אימונוסורבנטי המקושר לאנזים שמזהה תאים בודדים מפרישי ציטוקינים. ססיל צ'רקינסקי תיאר לראשונה את ELISpot ב-1983.זהו סוג של בדיקה המתמקדת במדידה כמותית של תדירות הפרשת ציטוקינים עבור תא בודד. זה גם מסווג כטכניקה המשתמשת בנוגדנים כדי לזהות אנליט חלבון ביולוגי או כימי. מבחן פלואורוספוט הוא וריאציה של מבחן אליספוט, המשתמש בקרינה על מנת לנתח אנליטים מרובים (חלבונים מופרשים יותר).
מנגנון של מבחן Elispot
במנגנון זה, נוגדנים חד שבטיים ספציפיים לציטוקינים מתווספים לבארות של לוחות מיקרוליטר בתחילה. ואז התאים הרצויים שנצפו מתווספים לבארות. מאוחר יותר, התאים מודגרים. במהלך הדגירה של התאים מאפשרים לתאים להגיב לכל גירויים ולהפריש ציטוקינים. הציטוקינים שהופרשו על ידי התאים המודגרים יתחברו לנוגדנים שכן התאים מוקפים בנוגדנים חד שבטיים ספציפיים לציטוקינים.
איור 02: Elispot Assay
כדי לזהות את הנוגדנים החד שבטיים הספציפיים לציטוקינים, מוסיפים לבאר נוגדני זיהוי ספציפיים עם ביוטיניל. נוגדני זיהוי ספציפיים עם ביוטיניל לוכדים את הנוגדנים החד שבטיים הספציפיים לציטוקינים בבארות. יתרה מכך, מצומדים של סטרפטווידין-אנזים מתווספים לבארות על מנת להיקשר עם נוגדני הזיהוי. בשלב הסופי מוסיפים מצעים ספציפיים לבארות. התגובות של מצומדי אנזים ומצעים מייצרים כתמים ברורים בבארות. הנקודות הנבדלות הללו נקראות בקורא ELISpot אוטומטי. בסופו של דבר, זה יחשב עוד יותר את התדירות של הפרשת ציטוקינים.
מהם הדמיון בין אליסה לאליספוט?
- שניהם מבחני חיסון חימוניים מקושרים לאנזים.
- שני המבחנים מזהים אנליטי חלבון ספציפיים.
- מבחנים אלה משתמשים בנוגדנים ספציפיים כדי לזהות את אנליטי החלבון.
- שני המבחנים משתמשים באנזימים ומצעים.
- הם משמשים ככלי אבחון במעבדות רפואיות.
מה ההבדל בין אליסה לאליספוט?
Elisa הוא מבחן אימונוסורבנטי המקושר לאנזים הקובע את הריכוז הכולל של חלבוני האיתות המופרשים. מצד שני, Elispot הוא מבחן אימונוסורבנטי המקושר לאנזים המודד תאים מפרישים ציטוקינים בודדים. אז זה ההבדל העיקרי בין אליסה לאליספוט. יתרה מכך, בבדיקת Elisa, האנטיגן מקובע תחילה על בארות המיקרוליטר. לעומת זאת, בבדיקת Elispot, הנוגדן מקובע תחילה על בארות המיקרוליטר. לפיכך, זהו הבדל נוסף בין אליסה לאליספוט.
האינפוגרפיקה שלהלן מציגה ניתוח מפורט של ההבדל בין אליסה לאליספוט בצורת טבלה.
סיכום – אליסה נגד אליספוט
Elisa ו-Elispot הם שני מבחני אימונוסורבנט מקושרים לאנזים בשימוש נרחב ברפואה, פתולוגיה של צמחים, ביוטכנולוגיה ותעשיות פרמצבטיות שונות. אליסה מזהה נוכחות של ליגנד (חלבון) בדגימה נוזלית באמצעות נוגדנים המכוונים נגד הליגנד שיימדד. בדיקת Elispot היא שיטה בשימוש נרחב לניטור תגובות חיסון. הוא מזהה תאים מפרישים ציטוקינים בודדים באמצעות נוגדנים. זוהי גם טכניקת בדיקה חיסונית וגם טכניקה ביולוגית. לפיכך, זהו סיכום ההבדל בין אליסה לאליספוט.
