ההבדל העיקרי בין מיצוי DNA מהצומח לבעלי חיים הוא שבמיצוי DNA של צמחים, יש צורך לשבור את דופן התא על ידי טחינת הרקמה בקרח יבש או בחנקן נוזלי על מנת לשחרר תוכן תאי בזמן מיצוי DNA של בעלי חיים, אין צורך לבצע שלב זה מכיוון שלתאים של בעלי חיים אין דופן תא.
DNA גנומי הוא החומר הגנטי של תאי צמחים ובעלי חיים. DNA גנומי ייחודי לכל צמח או בעל חיים בנפרד. מיצוי הדנ"א של דנ"א באיכות טובה היא תנאי מוקדם למחקר מולקולרי. DNA של אורגניזמים מופק לצורך זיהוי, אבחון מחלות, איתור גנים ורצפים ספציפיים, מטרות משפטיות, בדיקות אבהות, רצף גנום ופיתוח תרופות וכו'.שיטת מיצוי ה-DNA משתנה בהתאם לסוג התאים - בין אם מדובר בתא מן החי או בתא צמחי.
מהו מיצוי DNA של צמחים?
DNA בתאי צמחים מופק למחקרים מולקולריים שונים. זה נדרש לחלץ DNA גנומי שלם וטהור. לפיכך, ישנם סוגים שונים של פרוטוקולי מיצוי DNA אשר שונים מפרוטוקולי מיצוי DNA מתאי בעלי חיים. הסיבה לכך היא שלתאים צמחיים יש דופן תא שאותו יש לשבור כדי להוציא תוכן סלולרי.
חילוץ נעשה בדרך כלל על ידי טחינת רקמות הצמח בקרח יבש או חנקן נוזלי באמצעות מכתש ועלי. לאחר מכן מופרעים קרומי התא, והתוכן הסלולרי נלקח אל חיץ מיצוי. זה נעשה בדרך כלל באמצעות חומר ניקוי; חיץ SDS (sodium dodecyl sulfate) או CTAB (cetyltrimethylammonium bromide). ה-DNA המשוחרר מוגן מפני נוקלאזות אנדוגניות באמצעות חומר קלתי כמו EDTA. יתר על כן, חלבונים מופרדים מה-DNA באמצעות כלורופורם או פנול.
איור 01: מיצוי DNA של צמחים
צמחים מסנתזים פוליסכרידים ופוליפנולים, כולל פלבנואידים ומטבוליטים משניים אחרים. תרכובות אלו מפריעות למיצוי של DNA גנומי טהור. לפיכך, רוב פרוטוקולי מיצוי ה-DNA של הצמח כוללים שלב נוסף, כגון טכניקת שיפוע צפיפות צסיום כלוריד לחיסול תרכובות אלו.
רוב הפרוטוקולים למיצוי DNA ממליצים להשתמש בדגימות עלים טריים לצורך מיצוי DNA. שיטות מסוימות אינן כוללות כימיקלים מסוכנים כגון חנקן נוזלי ופנול. פרוטוקול CTAB (Cetyl trimethylammonium bromide) הוא פרוטוקול מיצוי DNA של צמחים פופולרי המאפשר מיצוי של DNA גנומי צמחי באיכות גבוהה. זוהי שיטה פשוטה, בטוחה, אמינה וחסכונית למיצוי DNA של צמחים.רוב השיטות האחרות הן גרסאות מתוקנות של שיטת CTAB.
מהי מיצוי DNA של בעלי חיים?
מיצוי DNA של בעלי חיים הוא מיצוי של DNA גנומי מתאי בעלי חיים לצורך ניתוח מולקולרי. שלא כמו מיצוי DNA של צמחים, פירוק דופן התא אינו הכרחי לתאי בעלי חיים מכיוון שהם חסרים דופן תא. תאי דם הם הסוג הנפוץ ביותר של תאי בעלי חיים המשמשים למטרות שונות.
איור 02: מיצוי DNA
שיטת הפנול-כלורופורם היא אחת הבחירות הטובות ביותר עבור תאי דם. התפוקה והאיכות של ה-DNA גבוהות בעת הפקת DNA משיטה זו. זהו פרוטוקול מיצוי DNA נוזלי-נוזל, ושיטה זו מפרידה מולקולות DNA על בסיס מסיסותן בתמיסות בלתי ניתנות לערבב.פנול, כלורופורם ואיזואמיל אלכוהול הם שלושת המרכיבים המובילים בשיטה זו.
מהם הדמיון בין מיצוי DNA של צמחים ובעלי חיים?
- במהלך מיצוי DNA של צמחים ובעלי חיים, יש לשבש את ממברנות התא.
- יש להגן על ה-DNA מפני נוקלאזות אנדוגניות.
- יתר על כן, יש למנוע גזירה של ה-DNA.
- ערכות מסחריות זמינות למיצוי DNA של צמחים ו-DNA של בעלי חיים.
- רוב שיטות מיצוי ה-DNA של צמחים ובעלי חיים זקוקות לשינוי וסטנדרטיזציה מתמשכים.
מה ההבדל בין מיצוי DNA של צמחים ובעלי חיים?
ההבדל העיקרי בין מיצוי DNA של צמחים ובעלי חיים הוא שמיצוי DNA של צמחים מצריך טחינת רקמת צמחים בקרח יבש או חנקן נוזלי על מנת לשבור את דופן התא בעוד שאיצוי DNA של בעלי חיים אינו מצריך שלב זה מכיוון שהם בעלי חיים לתאים אין דופן תא.שיטת CTAB היא אחת השיטות הטובות ביותר למיצוי DNA של צמחים בעוד ששיטת הפנול-כלורופורם היא אחת השיטות הטובות ביותר למיצוי DNA של בעלי חיים.
להלן אינפוגרפיקה מציגה את ההבדלים בין מיצוי DNA של צמחים ובעלי חיים.
סיכום – מיצוי DNA של צמח לעומת בעלי חיים
זמינות שיטות שונות למיצוי DNA מסוגי תאים שונים. לכן, פרוטוקולי מיצוי DNA של צמחים שונים מפרוטוקולי מיצוי DNA של תאי בעלי חיים. מיצוי DNA של צמחים דורש שיבוש של דופן התא, קרום התא והממברנה הגרעינית ואילו מיצוי DNA של בעלי חיים דורש פירוק של קרום התא והממברנה הגרעינית. חשוב מכך, מיצוי DNA של תאי בעלי חיים אינו מצריך שיבוש של דפנות התא על ידי טחינה בקרח יבש או חנקן נוזלי.לפיכך, זהו ההבדל העיקרי בין מיצוי DNA של צמחים ובעלי חיים.
