ההבדל העיקרי בין FPLC ל-HPLC הוא ש-FPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המטהרת ביו-מולקולות גדולות כגון חלבונים, נוקלאוטידים ופפטידים, בעוד HPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית שמפרידה בין תרכובות במשקל מולקולרי קטן.
כרומטוגרפיה נוזלית היא טכניקה המשמשת להפרדת דגימה למרכיביה האישיים. הפרדה זו מתרחשת עקב האינטראקציה של דגימות ספציפיות עם שלבים ניידים ונייחים. רכיבים בתוך דגימה מופרדים על סמך הזיקה של כל רכיב לשלב הנייד בכרומטוגרפיה נוזלית. כאשר השלב הנייד והדגימה עוברים דרך עמודה, מרכיבי הדגימה מתחילים להיפרד לרצועות שניתן לזהות באמצעות ספקטרוסקופיה UV-VIS.לכן, FPLC ו-HPLC הם שני סוגים של טכניקות כרומטוגרפיה נוזלית.
מה זה FPLC?
FPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המטהרת ביו-מולקולות גדולות כגון חלבונים, נוקלאוטידים ופפטידים. כרומטוגרפיית נוזלי החלבון המהירה (FPLC) פותחה ושווקה לראשונה בשוודיה על ידי חברת Pharmacia בשנת 1982. היא משמשת לעתים קרובות לניתוח או לטיהור תערובות חלבון. זה מתרחש בהתבסס על העיקרון של זיקה של רכיבי המדגם לנוזל נע (פאזה ניידת) ולחומר מוצק נקבובי (פאזה נייחת). ב-FPLC, השלב הנייד הוא חיץ, והשלב הנייח הוא שרף המורכב מחרוזים. זה בדרך כלל מורכב מאגרוז צולב ארוז בעמודת זכוכית גלילית או פלסטיק.
איור 01: מכשיר FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
ברוב אסטרטגיית ה-FLPC, נעשה שימוש בשרף חילופי יונים. לכן, החלבון המעניין ייקשר לשרף על ידי אינטראקציית מטען. טכניקת FLPC משתמשת גם בשני מאגרים: מאגר 1 (המאגר הפועל) ומאגר 2 (מאגר האלוציה). בתחילה, בעת הפעלת חיץ ותערובת דגימה דרך העמודה, החלבון המעניין בתערובת ייקשר לשרף על ידי אינטראקציית מטען. אבל החלבון המעניין מתנתק וחוזר לתמיסה במאגר elution כאשר חיץ ה-elution עובר בעמודה בסוף התהליך. מאוחר יותר, התמיסה (הפלטה המכילה חלבון מעניין) עוברת דרך שני גלאים, המודדים את ריכוז המלח וריכוז החלבון. כאשר כל חלבון נפלט, הוא מופיע כ"שיא" במהלך הזיהוי וניתן לאסוף אותו לשימוש נוסף.
מה זה HPLC?
HPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המפרידה בין תרכובות במשקל מולקולרי קטן. בשנת 1969, ה-HPLC הראשון יוצר באופן מסחרי על ידי Waters Corporation, ארה ב.בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), תערובת דגימה (אנליט) בממס (פאזה ניידת) נשאבת דרך עמודה עם חומר אריזה כרומטוגרפי (פאזה נייח) בלחץ גבוה. תערובת הדגימה נישאת על ידי זרם גז נשא נע של הליום או חנקן.
איור 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
הרכיבים בתערובת המדגם שיש להם את כמות האינטראקציה הנמוכה ביותר עם השלב הנייח או את הכמות הגדולה ביותר של אינטראקציה עם השלב הנייד ייצאו מהעמודה מהר יותר. מצד שני, הרכיבים בתערובת הדגימה שיש להם הכי הרבה אינטראקציה עם הפאזה הנייח או הכי פחות אינטראקציה עם השלב הנייד ייצאו מהעמודה לאט יותר. בהתבסס על עקרון האינטראקציה לעיל, ניתן להפריד את מרכיבי תערובת הדגימה.יתרה מכך, גלאי המכשיר מזהה כל מרכיב בתערובת הדגימה שיוצא מהעמודה. HPLC משמש לבדיקת דגימות סביבתיות וביולוגיות עבור נוכחות או היעדר תרכובות ידועות, כגון תרופות, רעלים או חומרי הדברה. הוא משמש בתעשיות שונות כמו תרופות, איכות הסביבה, זיהוי פלילי וכימיקלים.
מהם הדמיון בין FPLC ל-HPLC?
- FPLC ו-HPLC הם סוגים של כרומטוגרפיה נוזלית.
- שניהם משמשים להפרדה וזיהוי דגימות ביולוגיות.
- יש להם פאזה ניידת נוזלית ופאזה נייחת מוצקה.
- שתי הטכניקות משתמשות בעמודה כדי לעבור דרך המדגם.
- טכניקות אלו משתמשות במשאבות, גלאים, שסתומים ותוכנה להפרדה וזיהוי דגימות.
מה ההבדל בין FPLC ל-HPLC?
FPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המשמשת לטיהור ביו-מולקולות גדולות כגון חלבונים, נוקלאוטידים ופפטידים. HPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המשמשת להפרדת תרכובות במשקל מולקולרי קטן. אז זה ההבדל העיקרי בין FPLC ל- HPLC. יתר על כן, FPLC משתמש במנטרי pH ומוליכות וכן בקולטי שברים. לעומת זאת, HPLC אינו משתמש במנטרי pH ומוליכות ובקולטי שברים.
האינפוגרפיקה שלהלן מפרטת הבדלים נוספים בין FPLC ל-HPLC בצורת טבלה.
סיכום – FPLC לעומת HPLC
כרומטוגרפיה היא טכניקה אנליטית מעבדתית המשמשת להפרדה של רכיבים מתערובת. הוא מחולק למספר סוגים כגון כרומטוגרפיה עמודה, כרומטוגרפיה גז, כרומטוגרפיה נוזלית, כרומטוגרפיה של חילופי יונים וכו'. FPLC ו-HPLC הם שני סוגים של טכניקות כרומטוגרפיה נוזליות. FPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המשמשת לטיהור ביומולקולות גדולות כגון חלבונים, נוקלאוטידים ופפטידים. מצד שני, HPLC הוא סוג של כרומטוגרפיה נוזלית המשמשת להפרדת תרכובות במשקל מולקולרי קטן.לפיכך, זהו הסיכום של מה ההבדל בין FPLC ל-HPLC.
