ההבדל העיקרי בין צביעת Coomassie לכסף הוא שצביעת Coomassie היא טכניקת צביעת חלבון המשתמשת בכתם כחול מבריק, בעוד שצביעת רסיס היא טכניקת צביעת חלבון המשתמשת בכתם כסף.
הפרדת חלבונים וזיהוי הם שלבים קריטיים בניתוח פרוטאום. הם זקוקים לאפיון חלבון ברזולוציה גבוהה לאחר אלקטרופורזה של ג'ל. ישנן טכניקות צביעה רבות הכוללות כתמים שונים כגון צבעים אניונים (כחול מבריק), קטיוני מתכת (אימידאזול-אבץ), כתמי כסף וצבעים פלורסנטים וכו'. לפעמים ניתן להשתמש גם בבדיקות רדיואקטיביות.בחירת טכניקת הצביעה תלויה בפשטות, זמינות ציוד הדמיה במעבדה וכו'.
מה זה Coomassie Staining?
צביעת Coomassie היא טכניקת צביעת חלבון המשתמשת בכתם כחול מבריק של Coomassie. זה נקרא בדרך כלל טכניקת הקומאסי הכחול. Coomassie brilliant blue הוא צבע החלבון האניוני הפופולרי ביותר. כתם זה בדרך כלל צובע כמעט את כל החלבונים עם ליניאריות כמותית טובה ברגישות בינונית. כתם כחול מבריק Coomassie נקשר באופן לא ספציפי כמעט לכל החלבונים. ישנן שתי גרסאות שונות של כתם כחול מבריק Coomassie: R-250 ו-G-250. R-250 מציע זמני צביעה קצרים יותר, בעוד ש-G-250 זמין בניסוחים רגישים וידידותיים יותר לסביבה.
איור 01: Coomassie Staining
צבעי קומסי פופולריים מאוד במחקרי ספקטרומטריית מסה ובמחקרי זיהוי חלבונים. יתר על כן, כתם coomassie bio-safe הוא ניסוח לא מסוכן של coomassie blue G-250 הזמין כיום בשוק. היתרון של ניסוח זה הוא שהוא דורש רק מים לשטיפה והסרת כתמים. כתם coomassie בעל בטיחות ביולוגית מציעה רגישות שווה ערך לקובצי Coomassie blue G-250 אך טובה יותר מכתם Coomassie R-250. יתר על כן, יש לו פרוטוקול צביעה פשוט ומהיר יותר מאשר ה-Coomassie blue G-250 הרגיל. החיסרון של מכתים כחולים Coomassie הוא שהוא פחות רגיש בהשוואה לצביעת כסף. מכתים כחולים Coomassie רגישים בערך פי 50 מצביעת כסף. עם זאת, בשל פשטותו בכריכה, הוא מועדף במחקרים רבים.
מה זה צביעת כסף?
כתמת כסף היא טכניקת צביעת חלבון המשתמשת בכתם כסף.צביעת כסף משמשת להכתמת ג'ל אגרוז ופוליאקרילאמיד כאחד. צביעת הכסף של חלבון בג'ל אגרוז פותחה לראשונה בשנת 1973 על ידי Kerenyi ו-Gallyas. מאוחר יותר, הוא הותאם לחלבונים בג'לים של פוליאקרילאמיד המשמשים ב-SDS-PAGE. כיום, צביעת כסף משמשת גם לצביעה של DNA או RNA. על מנת להכתים את הג'לים, הג'לים מודגרים בתמיסת חנקתי כסף בשיטה זו. צביעת כסף מכתימה את האתרים שבהם קיימים חלבונים מחום לשחור.
איור 02: צביעת כסף
עוצמת צביעת הכסף תלויה במבנה הראשוני של החלבון. יתרה מכך, ניקיון הכלים בהם נעשה שימוש וטוהר הריאגנטים יכולים גם להשפיע על איכות צביעת הכסף.עם זאת, החיסרון של צביעת כסף הוא שהיא אינה מסוגלת לזהות את כל החלבונים, במיוחד גליקופרוטאין וחלבונים עם קבוצות גדולות שונות המחוברות לשרשראות הצדדיות שלהם.
מהם הדמיון בין Coomassie ו-Silver Staining?
- צביעת קומסי וכסף הן שתי טכניקות המשמשות לצביעה של חלבון.
- הם יכולים לצבוע גם חלבונים וגם DNA.
- לשתי טכניקות הצביעה יש חסרונות.
- לטכניקות האלה יש שלבים דומים, כמו תיקון, צביעה והסרת כתמים.
מה ההבדל בין Coomassie ו-Silver Staining?
צביעת Coomassie היא טכניקת צביעת חלבון המשתמשת בכתם כחול מבריק, בעוד שצביעת רסיס היא טכניקת צביעת חלבון המשתמשת בכתם כסף. לפיכך, זה ההבדל העיקרי בין Coomassie וצביעת כסף. יתר על כן, צביעת Coomassie פחות רגישה מצביעת כסף.
האינפוגרפיקה שלהלן מפרטת את ההבדלים בין צביעת Coomassie וכסף בצורת טבלה להשוואה זו לצד זו.
סיכום – Coomassie vs Silver Staining
כדי להמחיש חלבונים, ניתן לבצע ריאקציה כימית המייצרת צבע קושר או צבע ספציפי לחלבון. זה נקרא צביעת חלבון. צביעת קומסי וכסף הן שתי טכניקות המשמשות בצביעת חלבון. טכניקת צביעת Coomassie משתמשת בכתם כחול מבריק של Coomassie בעוד שצביעת רסיס משתמשת בכתם כסף. אז זה ההבדל העיקרי בין Coomassie וצביעת כסף.
